讓百歐博偉告訴您酸奶中的乳酸菌該怎么檢測？-ATCC菌種
中國微生物菌種查詢網(wǎng) / 2018-09-11 16:33:58
讓百歐博偉告訴您酸奶中的乳酸菌該怎么檢測？-ATCC菌種
活性酸奶需要控制各種乳酸菌的比例，有些國家將乳酸菌的活菌數(shù)含量作為區(qū)分產(chǎn)品品種和質(zhì)量的依據(jù)。由于乳酸菌對營養(yǎng)有復(fù)雜的要求，生長需要碳水化合物、氨基酸、肽類、脂肪酸、酯類、核酸衍生物、維生素和礦物質(zhì)等，一般的肉湯培養(yǎng)基難以滿足其要求。測定乳酸菌時必須盡量將試樣中所有活的乳酸菌檢測出來。要提高檢出率，關(guān)鍵是選用特定良好的培養(yǎng)基。采用稀釋平板菌落計數(shù)法，檢測酸奶中的各種乳酸菌可獲得滿意的結(jié)果。
一、試驗材料
1.供試材料 酸乳：市售，不同廠家的6 種酸乳分別標號為1＃、2＃、3＃、4＃、5＃、6＃，并且均為原味凝固型，生產(chǎn)日期相同的合格產(chǎn)品，均添加有保加利亞乳桿菌和嗜熱鏈球菌。其中只有1＃ 酸奶中添加了1 種新菌種。
2.主要試劑與藥品超低分子量SDS-PAGE電泳Marker，分子量分別為20100、14400、7823、5856 u 和3313 u；多肽標準品；丙稀酰胺(Acr)；甲叉雙丙稀酰胺(Bis)；三羥甲基氨基甲烷(Tris)；十二烷基磺酸鈉(SDS)；四甲基乙二胺(TEMED)；過硫酸銨(AP)；三羥甲基甘氨酸(Tricine)；甘油；考馬斯亮藍G-250；巰基乙醇；聚乙二醇6000等。
3.主要儀器與設(shè)備TGL-16M 高速臺式冷凍離心機，分子量1000 u 透析袋，Hoefer mini VE電泳槽，電泳儀、顯微攝影系統(tǒng)，50 μL 微量進樣器，PHS-3C 酸度計，超凈工作臺，電子天平，電熱恒溫培養(yǎng)箱，顯微鏡，電熱恒溫水浴鍋，電熱鼓風干燥箱等。
二、試驗方法及參數(shù)確定
1.市售酸乳中多肽物質(zhì)的提取離心除雜：分別取剛打開包裝的新鮮市售酸乳樣品各50 mL，然后于8000 r/min、4 ℃條件下冷凍離心20 min，取上清液。透析：取上清液置分子量1000 u 透析袋中，用蒸餾水于4 ℃冰箱中透析48 h，其間每隔4 h 更換1 次透析液。濃縮：用聚乙二醇6000 濃縮至原體積的1/3，即得到待檢測多肽樣品。
2. 酸乳中多肽物質(zhì)的檢測Tricine -SDS -PAGE 電泳法。適合小肽分析的方法有很多，例如毛細管電泳、高效液相色譜、質(zhì)譜、離子交換色譜、SDS-PAGE 電泳等。由于SDS-PAGE 電泳法對樣品純度要求不是很高[9]，以及實驗室條件等各因素限制， 最終采用適用于小肽分析的SDS -PAGE-Tricine 系統(tǒng)[10]對水溶性多肽進行種類和分子量分析。通過大量試驗，最終確定的電泳參數(shù)為：上樣量為10 μL；凝膠濃度分別為：濃縮膠濃度4%，分離膠濃度15%；電流選擇：濃縮膠時18 mA，分離膠時25 mA。
先將酸奶樣品攪拌均勻，用無菌移液管吸取樣品25 ml加入盛有225 ml無菌水的三角瓶中，在旋渦均勻器上充分振搖，務(wù)必使樣品均勻分散，即為10：1的樣品稀釋液，然后根據(jù)對樣品含菌量的估計，將樣品稀釋至適當?shù)南♂尪?。選用2~3個適合的稀釋度，培養(yǎng)皿貼上相應(yīng)的標簽，分別吸取不同稀釋度的稀釋液1 ml置于平皿內(nèi)，每個稀釋度作2個重復(fù)。然后用溶化冷卻至46 ℃左右的MRS或改良CHALMERS培養(yǎng)基倒平皿，迅速轉(zhuǎn)動平皿使之混合均勻，冷卻成平板。