百歐博偉生物和您一起制備微生物檢測(cè)培養(yǎng)基
中國(guó)微生物菌種查詢網(wǎng) / 2018-09-11 09:51:36
如何正確的制備微生物檢測(cè)培養(yǎng)基呢？今天小編攜百歐博偉生物和您一起來制備。
一、稱取
用精確度1/100的電子天平稱取培養(yǎng)基所需藥品。先根據(jù)配方計(jì)算出配制一定量培養(yǎng)基所需各種成分藥品的量，然后用天平準(zhǔn)確稱取。稱量時(shí)用稱量紙折疊成簸箕狀盛放藥品。
二、溶化
培養(yǎng)基放入燒杯或搪瓷缸中，慢慢加入少量所需水，邊加入邊用玻棒攪拌。如果培養(yǎng)基中不含有瓊脂，培養(yǎng)基不需要加熱；如果含有瓊脂，則需要用本生燈或電磁爐加熱煮沸，完全溶解后，再補(bǔ)齊所需水，并攪拌均勻（如圖3所示）。如果配制的培養(yǎng)基量很大，可用不銹鋼鍋加熱溶化，可先用溫水加熱并隨時(shí)攪動(dòng)，防止焦化，如有焦化現(xiàn)象，配制的培養(yǎng)基就不能使用，要重新配制。
配制培養(yǎng)基時(shí)不可用銅或鐵的容器溶化，因銅或鐵制容器可能會(huì)使培養(yǎng)基中的銅和鐵的含量超標(biāo)，影響實(shí)驗(yàn)（培養(yǎng)基中銅含量大于0.3mg/L，細(xì)菌不宜生長(zhǎng)，鐵含量超過0.14mg/L，妨礙細(xì)菌產(chǎn)毒素）。對(duì)容易發(fā)生反應(yīng)，產(chǎn)生沉淀的藥品，要分開溶解，最后加入培養(yǎng)基，如磷酸氫二鉀和硫酸鎂。
三、調(diào)pH
雖然培養(yǎng)基中含有緩沖物質(zhì)成分，能使培養(yǎng)基的pH盡可能的保持在要求的范圍內(nèi)，但是配出的培養(yǎng)基若不符合要求，就要進(jìn)行必要的調(diào)整。如果有已校準(zhǔn)pH計(jì)，可用pH計(jì)，如果沒有，可用精密的pH試紙，再根據(jù)需要用1 mol/L氫氧化鈉或1mol/L鹽酸（微調(diào)可用0.1氫氧化鈉或0.1mol/L鹽酸）調(diào)制所需的pH。培基的pH一般為7.4～7.6，也有酸性或堿性的。用氫氧化鈉調(diào)整的需要高壓滅菌的培養(yǎng)基，在調(diào)整pH時(shí)要調(diào)至高出所需0.1個(gè)～0.2個(gè)單位，因用氫氧化鈉調(diào)整時(shí)，高壓滅菌后，培養(yǎng)基的pH要降低0.1~0.2。如培養(yǎng)基中含有碳酸鈣成分，可不pH。
四、過濾
配成的培養(yǎng)基，若無特殊要求，可省略此步。若有沉淀或渾濁．需要澄清的．液體培養(yǎng)基可用油紙過濾。而固體培養(yǎng)基可用中間夾一薄層脫脂棉的雙層紗布過濾。如果過濾法還不能達(dá)到澄清的要求，則可用蛋清澄清法，即培養(yǎng)基加熱冷卻到50~60℃，裝入三角瓶?jī)?nèi)（不超過容量的二分之一），按1000mL加人1個(gè)～2個(gè)雞蛋的蛋清，用力搖晃3-5min，高壓蒸汽滅菌121℃、20min，取出趁熱過濾即可。
五、分裝
配制好的培養(yǎng)基根據(jù)不同的用途分裝在三角瓶、試管等容器中，分裝試管，如果試管量很大，可用自動(dòng)分液器，如果試管量少，可用漏斗分裝。分裝量不超過容器容積的三分之二。三角瓶以不超過容積的二分之一為宜；瓊脂斜面以不超過試管長(zhǎng)度的五分之一為宜，滅菌后，擺成的斜面為培養(yǎng)基量的三分之一，底層為三分之二的量為宜；半固體瓊脂分裝量為試管長(zhǎng)度的三分之一；用來接種或保菌的高層瓊脂，分裝量為試管長(zhǎng)度的四分之一或三分之一，用來接種厭氧菌的要達(dá)到三分之二；瓊脂平板，內(nèi)徑為90mm的以13mL~15 mL為宜，內(nèi)徑70mm的平板為8mL~10 mL，制成的瓊脂平板若表面水分較多，可將平板倒扣，放置在37℃培養(yǎng)箱內(nèi)30min，干燥后再用。每批培養(yǎng)基應(yīng)另外分裝一小玻璃瓶（約20mL）與該批培養(yǎng)基同時(shí)滅菌，為測(cè)定該批培養(yǎng)基最終pH。 中國(guó)微生物菌種查詢網(wǎng)特設(shè)ATCC板塊是ATCC菌種保藏中心，專業(yè)提供ATCC菌種的保藏，查詢以及購(gòu)買服務(wù)。
正確制備出微生物檢測(cè)培養(yǎng)基大致就以上這五個(gè)步驟了。1、稱取，2、溶化，3、調(diào)pH，4、過濾，5、分裝.很簡(jiǎn)單吧，小伙伴們實(shí)驗(yàn)室走起！