一、背景及概述
肺炎鏈球菌屬于鏈球菌科，鏈球菌屬，俗稱肺炎球菌或肺炎雙球菌。此菌廣泛分布于自然界，主要寄生于人上呼吸道，大多數(shù)人的鼻咽腔有本菌存在。多數(shù)菌株不致病或致病力很弱，少部分菌株致病力較強(qiáng)，主要引起人的大葉性肺炎。該菌為革蘭陽(yáng)性球菌，呈矛頭狀成雙排列或呈短鏈狀。無鞭毛，無芽孢，在機(jī)體內(nèi)形成莢膜，經(jīng)人工培養(yǎng)后莢膜逐漸消失。
本菌有自溶作用，在陳舊培養(yǎng)基中常找不到菌體，只有革蘭陰性碎片。莢膜不易著色，可用特殊方法染色。該菌具有多種抗原：種屬特異性抗原 (位于細(xì)胞壁的多糖抗原)、型特異性抗原 (莢膜中多糖多聚體) 和菌體核蛋白抗原。肺炎鏈球菌對(duì)外界抵抗力弱，加熱52～56℃ 5min即被殺死。在30g/L石炭酸溶液和1g/L升汞溶液中1～2min可被殺死。無陽(yáng)光照射的干燥痰中能存活1～2個(gè)月。對(duì)磺胺和青霉素均敏感。
二、致病性
肺炎鏈球菌主要靠莢膜侵襲力致病，不產(chǎn)生外毒素。除引起大葉性肺炎外，還可引起支氣管肺炎、心內(nèi)膜炎、胸膜炎、腹膜炎、中耳炎、腦膜炎和關(guān)節(jié)炎等。肺炎鏈球菌呈圓形，在痰和膿液中常形成短鏈狀，無鞭毛；在人和動(dòng)物體內(nèi)可產(chǎn)生莢膜。該菌對(duì)溫度抵抗力較弱，在 52～56℃時(shí)加熱15～20分鐘即被殺死；對(duì)干燥的抵抗力較強(qiáng)，在陰暗處的干痰中可生存1～2 月。這種細(xì)菌在自然界中分布廣泛，常生活在正常人的鼻腔中，多數(shù)不致病或致病力很弱，少數(shù)致病力較強(qiáng)。其能否致病與莢膜有密切關(guān)系，因莢膜能抵抗人體內(nèi)吞噬細(xì)胞的吞噬作用而大量繁殖，引起疾病。肺炎鏈球菌主要引起大葉性肺炎以及氣管炎、中耳炎、腦膜炎、胸膜炎、心內(nèi)膜炎、敗血癥等疾病。典型的大葉性肺炎起病急驟，病人有高燒、寒顫，開始時(shí)有陣發(fā)性干咳，不久有少量粘液痰，隨后痰變黃色，呈粘膿性。病人在發(fā)熱期間，應(yīng)臥床休息，吃容易消化的食物，多喝水。一般病程1～2周。預(yù)防肺炎鏈球菌感染關(guān)鍵在于養(yǎng)成良好的衛(wèi)生習(xí)慣，保持環(huán)境衛(wèi)生。必要時(shí)對(duì)體弱兒童及老年人可用疫苗進(jìn)行預(yù)防注射。用細(xì)菌莢膜多糖制備的多糖疫苗進(jìn)行預(yù)防，效果較好。磺胺類藥物、青霉素等對(duì)肺炎等疾病的治療較為有效。
三、抑制方法
肺炎鏈球菌的莢膜是主要毒力因子之一，對(duì)細(xì)菌在宿主體內(nèi)生存具有重要意義，肺炎鏈球菌憑借莢膜抵御巨噬細(xì)胞吞噬，逃避機(jī)體的免疫清除。而肺炎鏈球 菌基因SPD_1672編碼的SPD_1672假想蛋白可能參與莢膜的形成，采用BLAST program分析軟件，在NCBI數(shù)據(jù)庫(kù)對(duì)36個(gè)體內(nèi)誘導(dǎo)基因進(jìn)行功能域分析，發(fā)現(xiàn) 由基因(SPD_1672)編碼SPD_1672蛋白屬于膜結(jié)合蛋白，其整個(gè)保守區(qū)域(aa 28-386)與脂質(zhì)A核心-O-抗原連接酶有較高的同源性，并且其中的一段 (aa260-322)與脂質(zhì)A核心-O-抗原連接酶中Wzy-C(O-抗原聚合酶)高度同源，即SPD-1672蛋白可能是一種具有連接功能的膜結(jié)合蛋白。用TMHMM軟件對(duì) SPD-1672蛋白進(jìn)行結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)也提示它可能具有脂質(zhì)A核心-O-抗原連接酶的結(jié)構(gòu)。
如果把肺炎鏈球菌的SPD_1672基因缺陷后，莢膜形成可能受阻，細(xì)菌的毒力也可能減弱。構(gòu)建SPD_1672基因缺陷菌發(fā)現(xiàn)細(xì)菌菌體減小，不成鏈，電鏡下 觀察莢膜很薄很稀疏，又通過小鼠體內(nèi)毒力實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)注射野生菌14個(gè)小時(shí)后小 鼠全部死亡，而注射缺陷菌的小鼠全部存活，且缺陷菌在腹腔內(nèi)3個(gè)小時(shí)內(nèi)基本 被清除，尚存的細(xì)菌莢膜不能完全回復(fù)，提示SPD_1672基因所表達(dá)蛋白是一種影響莢膜形成的毒力因子。
CN200910104370.9所述肺炎鏈球菌減毒活菌疫苗為含有肺炎鏈球菌SPD_1672基因功能缺陷的肺炎鏈球菌菌株的組合物。所述肺炎鏈球菌菌株為包括全基因缺失、基因小片段缺失、基因斷裂、插入 突變、點(diǎn)突變等導(dǎo)致SPD_1672蛋白功能缺陷而形成的減毒肺炎鏈球菌菌株。該組合物中還具有一種或一種以上醫(yī)學(xué)上可接受的佐劑，佐劑包括CT佐劑、 CTB佐劑、LT佐劑、MPL、鋁佐劑、CPG、福氏完全和不完全佐劑、脫乙酞?dú)ざ嗵穷w粒等。
該肺炎鏈球菌減毒活菌疫苗可由本技術(shù)領(lǐng)域常規(guī)的方法制備而得：
1、用引物修飾法PCR擴(kuò)增出spd1672up-erm-spd1672down片段，膠回收后備用。
2、將膠回收片段轉(zhuǎn)化入肺炎鏈球菌D39中，得到缺陷菌。
3、提取缺陷菌DNA，用引物修飾法PCR擴(kuò)增出spd1672up-erm-spd1 672down片段，膠回收后測(cè)序鑒定。
該肺炎鏈球菌減毒活菌疫苗具有以下優(yōu)點(diǎn)：
1、制做工藝簡(jiǎn)單，只要缺陷菌構(gòu)建好即可大量培養(yǎng)，成本低，周期短，能在全世界推廣使用；
2、對(duì) 所有年齡組的人群都有保護(hù)效果；
3、既有細(xì)胞免疫又有體液免疫，并能誘發(fā)免疫記憶；
4、可以產(chǎn)生非血清型依賴的保護(hù)作用；
5、粘膜途徑免疫既簡(jiǎn)便又安全。
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