醫(yī)用一次性防護服輻照滅菌用生物指示菌 短小芽孢桿菌Bacillus pumilus
中國微生物菌種查詢網 / 2020-05-11 08:09:23
醫(yī)用一次性防護服輻照滅菌用生物指示菌 短小芽孢桿菌Bacillus pumilus
為保障疫情防控期間緊急醫(yī)用一次性防護服的供給，國務院應對新型冠狀病毒感染的肺炎疫情聯(lián)防聯(lián)控機制醫(yī)療物資保障組于2020年2月8日發(fā)出了“關于疫情期間執(zhí)行《醫(yī)用一次性防護服輻照滅菌應急規(guī)范（臨時）》的通知”，要求各地可采用輻照（鈷60或電子加速器）方式對醫(yī)用防護服進行滅菌。實施輻照時，按照產品生產廠家要求，在產品箱中布放快速檢測生物指示物，輻照結束后，快速檢測生物指示物為陰性結果時符合產品放行要求。那么什么是生物指示物？輻照滅菌用的生物指示物應采用什么菌種、又具有什么特點呢？小編帶您來了解一下。
生物指示物定義在不同標準和規(guī)范中不盡相同：《醫(yī)療保健產品滅菌 輻射 第1部分： 醫(yī)療器械滅菌過程的開發(fā)、確認和常規(guī)控制要求》（GB 18280.1-2015）中是指“包含對規(guī)定的滅菌過程有確定抗力的活微生物的測試系統(tǒng)”；《醫(yī)療衛(wèi)生用品輻射滅菌消毒質量控制》（GB 16383-2014）中是指“對特定滅菌或消毒程序有確定的抗力，可供消毒滅菌效果監(jiān)測使用的微生物檢驗器材。”《消毒技術規(guī)范》（2002年版）中是指“將適當載體染以一定量的特定微生物，用于指示消毒或滅菌效果的制品”。
從以上定義可以看出生物指示物的要素為含有一定量的特定微生物，有確定抗力（以D值或D10值*表示），特定微生物的選擇至關重要。依據《中國藥典》（2015年版）、《消毒技術規(guī)范》和《一次性使用衛(wèi)生用品衛(wèi)生標準》（GB 15979-2002），電離輻射滅菌或消毒所采用的生物指示菌為短小芽孢桿菌Bacillus pumilus E601（ATCC 27142）。
依據ATCC網站公開信息，短小芽孢桿菌E601主要用于電離輻射滅菌控制和無菌保證。1956年Pepper RE等人采用陰極射線對18株芽孢桿菌屬Bacillus和7株梭菌屬Clostridium的芽孢抗輻射性能進行了研究，結果表明短小芽孢桿菌E601具有比較強的抗性。該菌株具有以下生物學特性：
革蘭氏陽性，菌體呈桿狀，成對出現(xiàn)，大小0.6-0.7×2.0-3.0μm，可形成芽孢，芽孢圓柱形或橢圓形，膨大，中生或端生，見圖1。菌落白色或乳白色，圓形，表面濕潤，光滑，有半透明和不透明兩種形態(tài)，邊緣整齊，可起皺、邊緣不規(guī)則，見圖2。好氧生長，有運動性，最低生長溫度5～15°C，最高生長溫度40～50°C。生長pH范圍 6.0～9.5。10％NaCl條件下可以生長。過氧化氫酶陽性。
圖1 短小芽孢桿菌B. pumilus顯微形態(tài)** 圖2 短小芽孢桿菌B. pumilus菌落形態(tài)**
電離輻射生物指示物采用短小芽孢桿菌B. pumilus芽孢制備而成。芽孢又稱內生孢子，是產芽孢細菌在營養(yǎng)缺乏條件下在胞內形成的圓形或橢圓形的休眠體，因含水量極低、抗逆性強，被廣泛用于高溫、紫外線、電離輻射等多種滅菌方法的監(jiān)測用指示物。
研究顯示，短小芽孢桿菌B. pumilus E601比蠟樣芽孢桿菌B. cereus、枯草芽孢桿菌B. subtillu及生孢梭菌Clostridium sporogenes等菌種的芽孢具有更高的抗輻射性能，其芽孢濃度在106CFU/個時，隨附著載體和介質不同，其D值在1.20～2.53kGy之間變化，采用濾紙片為載體、塑料袋包裝時，其對鈷-60照射的D值一般為1.7kGy，對電子直線加速器照射的 D值為1.85kGy，符合《消毒技術規(guī)范》和《一次性使用衛(wèi)生用品衛(wèi)生標準》（GB 15979-2002）中對電離輻射滅菌或消毒生物指示物要求。
在使用生物指示物進行消毒或滅菌效果監(jiān)測時，依據《醫(yī)療衛(wèi)生用品輻射滅菌消毒質量控制》（GB 16383-2014）要求，于最小劑量處，每次至少布放10片生物指示物，《消毒技術規(guī)范》要求每次測試至少選5箱，每箱產品布放3片生物指示物，將待檢箱置最小劑量處。
滅菌結束后，取出指示物接種營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)液作定性檢測或接種營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基作定量檢測，同時將未處理的生物指示物作為陽性對照相同接種，兩者均置35℃±2℃培養(yǎng)。陽性對照應在24h內有菌生長。定性培養(yǎng)樣品如連續(xù)觀察7d全部無菌生長，可報告生物指示物培養(yǎng)陰性，滅菌合格。定量培養(yǎng)樣品與陽性對照相比殺滅對數(shù)值***達到3.0也可報告滅菌合格。根據產品輻照滅菌的無菌保證水平（SAL）選擇生物指示物的定性或定量結果評價，如果產品SAL要求≤10-6，則應選擇定性培養(yǎng)，如果產品SAL要求≤10-3，則應選擇定量培養(yǎng)。
注：
* ：D值或D10值：在規(guī)定條件下，殺滅90%微生物數(shù)量所需的時間(min)或劑量。
**：圖1和圖2摘自《Bergey's Manual of Systematic Bacteriology》 (第二版，第3卷)
***：殺滅對數(shù)值：當微生物數(shù)量以對數(shù)表示時，指消毒前后微生物減少的對數(shù)值。
相關標準法規(guī)及參考文獻：
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