幾種測定化妝品菌落總數(shù)培養(yǎng)基的質(zhì)量比較！
小楊 / 2020-04-11 08:13:54
中國微生物菌種查詢網(wǎng)：隨著化妝品使用越來越廣泛。已成為人們?nèi)粘Ｉ钪械谋匦杵?。開展化妝品衛(wèi)生質(zhì)量監(jiān)測。是保障人民健康維護消費者的利益，如使用了細菌總數(shù)超標的化妝品。會導致皮膚感染 。因此，化妝品細菌總數(shù)測定是便于判明樣品被污染的程度。是對樣品進行衛(wèi)生學評價的重要依據(jù) 。按國家衛(wèi)生部頒布《化妝品衛(wèi)生規(guī)范》，卵磷脂、吐溫 8 0營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基是用于測定化妝品菌落總數(shù)的培養(yǎng)基。
現(xiàn)在生產(chǎn)培養(yǎng)基的廠家很多，為了解不同廠家生產(chǎn)的卵磷脂、吐溫8 0營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基 質(zhì)量，對 4種培養(yǎng)基進行比較 ?，F(xiàn)將結(jié)果報告如下 。
一、材料與方法
1、實驗菌株
大腸埃希菌 ( ATCC 25922 )，金黃色葡萄球菌 ( ATCC 6538) 。
2、培養(yǎng)基
卵磷脂、吐溫80營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基分別購自杭州天和微生物試劑有限公司．北京陸橋技術有限責任公司 ．廣東環(huán)凱微生物科技有限公司等3種干燥培養(yǎng)基，編號為1、2、3號 ，干燥培養(yǎng)基按產(chǎn)品說明書配制，均在有效期內(nèi)使用。自配卵磷脂、吐溫8 0營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，由本實驗室參照文獻方法配制。其蛋白胨采用日本進口材料，自配培養(yǎng)基編號為4號，共4種卵磷脂、吐溫 8 0營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基。
3、試劑
0.5％氯化三苯四氮唑 (TTC ) 121℃ 2 0min高壓滅菌，備用。
4、實驗方法
⑴菌液的準備
取大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌分別接種營養(yǎng)肉湯管。在37 ℃培 養(yǎng) 1 8 ～ 2 4 h。
⑵稀釋培養(yǎng)基并接種
將培養(yǎng)好的大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌兩種肉湯管用生理鹽水10倍稀釋 ，從10-1到l 0-7。選用平板上菌落數(shù)在5 0～1 0 0 c f u之間的稀釋度，然后取稀釋好菌懸液 1ml置入無菌平 皿，傾注加入0.5％TTC的卵磷脂、吐溫8 0營養(yǎng)瓊脂，每個平板1 5-2 0ml ，每種培養(yǎng)基接種3個平板。待凝固后將平板翻轉(zhuǎn)置 3 7 ℃培養(yǎng) 4 8 h取出觀察結(jié)果．并以每種培養(yǎng)基的 3個平板菌落平均數(shù)為各檢測數(shù)進行比較，試驗重復5次。
⑶實驗室室內(nèi)質(zhì)量控制 用菌落計數(shù)方法，取大腸埃希菌肉湯培養(yǎng)管用生理鹽水10倍稀 釋，從 10-1到10-7，吸取10菌懸液1ml注入無菌平板。共接種3個平板，然后將已溶解的營養(yǎng)瓊脂傾注平板 。混勻，待凝固置37℃培養(yǎng)48 h后作菌落計數(shù)，連續(xù)進行10次。將所得結(jié)果標入質(zhì)量控制圖。
二、結(jié) 果
1、4種培養(yǎng)基大腸埃希菌的計數(shù)比較
4種培養(yǎng)基對大腸埃希菌進行5次菌落計數(shù)重復試驗，結(jié)果顯示各種培養(yǎng)基的菌落大小與數(shù)量基本一致．差異無統(tǒng)計學意義 ( F=0.257，P>0.05) 。見表 1 。
表1：4種培養(yǎng)基大腸埃希菌生長菌落數(shù)比較
2、4種培養(yǎng)基對金黃色葡萄球菌細菌總數(shù)計數(shù)
連續(xù)進行5次實驗，結(jié)果顯示各種培養(yǎng)基的菌落大小與數(shù)量基本一致，差異無統(tǒng)計學意義 ( F= 0.066，P>0.05 )： 見表 2 。
表2：4種培養(yǎng)基金黃色葡萄球菌生長菌落數(shù)比較
3、實驗室室內(nèi)質(zhì)量控制
連續(xù) 1 0次菌落計數(shù)，測定值在 4.3×106—9.66×106之間，平均值為6.94×106cf u／ml 。s=1.74×106cf u／ml 。1 0次測定值均在`x±2 s范 圍 內(nèi) ，達到實驗室內(nèi)部控制標準要求。
三、討 論
實驗表明，在4種不同廠家生產(chǎn)的卵磷脂、吐溫 80營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基上，大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌的生長速度、菌落形態(tài)與數(shù)量無明顯差別 ，各種培養(yǎng)基的軟硬度、pH值等理化指標符合質(zhì)量要求，差異無統(tǒng)計學意義。但在透明度上自配的卵磷脂、吐溫80營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基較其他3種干燥培養(yǎng)基清晰透明，而3種干燥培養(yǎng)基配制的平板較混濁可能是由于培養(yǎng)基的原材料不同的關系。自配培養(yǎng)基用的是日本進口蛋白胨，其顏色偏淺 。蛋白胨是由蛋白質(zhì) (如酪蛋白、纖維蛋白)經(jīng)酶或酸堿分解而成。由于蛋白質(zhì)的來源和消化程度不同，因而制得的胨質(zhì)量相差很大，就是同一廠家不同批號的蛋白胨質(zhì)量也會有差異，所以是否這樣配制出來的培養(yǎng)基的透明度就有所不同。實驗室室內(nèi)質(zhì)量控制是保證實驗室檢驗結(jié)果準確 性的必要基礎。為確保本次實驗結(jié)果的準確性與可靠性，我們對實驗結(jié)果進行控制，繪制質(zhì)量控制圖 ，結(jié)果顯示，l 0次菌落總數(shù)測定值在4.3×106—9.66×106之間，均在允許誤差范圍，實驗結(jié)果在`x±2 s之內(nèi) ，未發(fā)現(xiàn)失控現(xiàn)象，從實驗穩(wěn)定、重復性好 ，表明本次培養(yǎng)基的實驗結(jié)果是可信的 。
近年，干燥培養(yǎng)基使用越來越廣泛，培養(yǎng)基的質(zhì)量關系到微生物實驗室檢測工作的成效 。因此 ，開展微生物培養(yǎng)基的質(zhì)控工作十分必要。目前，我國生產(chǎn)培養(yǎng)基的廠家很多，然而各廠家配制培養(yǎng)基的所采用配方有不同 ，有國家標準， 或是行業(yè)標準 。在制做方法上也各有異。如這次實驗用的卵磷脂 、吐溫 8 0營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基里的吐溫8 0試劑 ，有些廠家 產(chǎn)品是在使用該培養(yǎng)基時才加吐溫8 0。還有4號瓊脂培養(yǎng)基，有些廠家生產(chǎn)干燥培養(yǎng)基是在制備4號瓊脂平板時加入亞碲酸鉀及慶大霉素，而有的廠家將亞碲酸鉀、慶大霉素已經(jīng)加進干燥培養(yǎng)基里，兩種方法配制出來的4號瓊脂平板顏色就不一樣?，F(xiàn)在的商品培養(yǎng)基還存在一些問題，如培養(yǎng)基包裝不規(guī)范，沒有標明生產(chǎn)日期及有效期限，包裝標簽說明沒列出培養(yǎng)基的配方，還有的產(chǎn)品質(zhì)檢報告不規(guī)范等，干燥培養(yǎng)基的生產(chǎn)由于原料來源不同容易出現(xiàn)這樣或那樣的問題。因此，商品培養(yǎng)基的生產(chǎn)質(zhì)量要提高，不斷完善，要更加規(guī)范化、標準化 。據(jù)文獻介紹，實驗室不得使用不符合要求的培養(yǎng)基。所以 ，在購買干燥培養(yǎng)基時 ，應選擇技術力量強、性能穩(wěn)定、通過質(zhì)量管理體系認證企業(yè)的產(chǎn)品，而且不要經(jīng)常更換廠家生產(chǎn)，以避免試驗中出現(xiàn)使用不生產(chǎn)商的產(chǎn)品所造成的誤差，同時，無論自制還是商業(yè)提供培養(yǎng)基都需要按《 商業(yè)性微生物培養(yǎng)基質(zhì)量檢驗規(guī)范》進行質(zhì)量控制，使用高質(zhì)量的培養(yǎng)基，才能保證微生物檢驗結(jié)果的準確、公正、可靠 。