高壓蒸汽滅菌和干熱滅菌方法！
小楊 / 2020-03-19 08:56:56
一、原理
高壓蒸汽滅菌是實驗室最常用的滅菌方法，適用于培養(yǎng)基，生理鹽水，各種緩沖液及玻璃器皿的滅菌。常用高壓蒸汽滅菌鍋進行滅菌，滅菌鍋有立式、臥式和手提式三種。圖11-1 所示常用手提式滅菌鍋。高壓蒸汽滅菌的原理是通過提高滅菌鍋內的蒸汽溫度以達到滅菌目的，即，使滅菌鍋夾層的水加熱、沸騰，不斷產生蒸汽，以排除冷空氣，直至空氣排凈后（約排氣10-15 分鐘）關閉放氣閥，使蒸汽鍋密閉，這時隨蒸汽壓不斷上升，鍋內的溫度也隨之上升，當蒸汽壓（飽和蒸汽壓）升到1.05kg/cm2 時，鍋內溫度即達121.3℃，在該溫度下保持20-30 分鐘，可將所有微生物及芽孢殺死。滅菌所需時間和溫度取決于被滅培養(yǎng)基中營養(yǎng)物的耐熱性、容器體積大小和裝物量等因素。若滅砂土、石蠟油或含菌量大的物品則應適當延長滅菌時間。
干熱滅菌適用于玻璃器皿的滅菌。常用電熱烘箱進行，其結構如圖11-2 所示。干熱滅菌主要是利用高溫使微生物細胞內的蛋白質凝固變性而達到殺滅微生物的目的。細胞內蛋白質凝固性與其本身含水量相關。當菌體受熱時，環(huán)境和細胞內含水量越大，蛋白質凝固就越快，反之則慢。通常干熱滅菌時預先將各種器皿用紙包好或裝入金屬制培養(yǎng)皿箱、移液管筒內，再放入電熱烘箱，然后打開電源，加熱升溫至150-160℃，維持2 小時即可進行徹底滅菌。
二、儀器與材料
1、儀器：立式高壓蒸汽滅菌鍋，手提式高壓蒸汽滅菌鍋，電熱烘箱。
2、需滅菌的物品：培養(yǎng)基，無菌水，培養(yǎng)皿，用報紙包好的吸管等。
三、方法
1、高壓蒸汽滅菌
（1）加水：向滅菌鍋夾層加蒸餾水至適當水位刻度；
（2）裝料：放入需滅菌的物品；注意：裝量適當，使瓶口或試管口向中心擺放，不要緊貼鍋內壁，以防冷凝水沾濕棉塞！
（3）加蓋：蓋好滅菌鍋，對稱擰好螺栓；
（4）滅菌：通電加熱，待滅菌鍋排出大股水蒸汽時記時15 分鐘后，關閉排氣閥。繼續(xù)加熱至所需條件，如壓力達1.05kg/cm2 即121.3℃，維持20-30 分鐘；
（5）降壓：滅菌后立即關閉電源，待壓力降至0 時，打開排氣閥，放空剩余蒸汽。再打開鍋蓋，取出滅菌物品；
（6）后處理：滅菌完畢，放空夾層內的水，保持鍋內干凈。
2、干熱滅菌
（1）裝料：打開烘箱門，放入需滅菌的物品，關好烘箱門；（注意：勿使紙包物品緊靠烘箱壁，以免引起火災?。?；
（2）滅菌：打開排氣孔，接通電源，加熱升溫至160℃，關閉排氣孔，維持2 小時；（注意：滅菌溫度絕對不可以超過180℃?。?br />
（3）降溫：滅菌后，立即關閉電源，將溫度旋鈕轉至0。待溫度降至20℃以下時，打開烘箱門，取出滅菌物品。
3、滅菌前玻璃器皿的包裝
（1）吸管、滴管的包裝：
① 裁紙：將8 開報紙裁成約5cm 寬的長紙條；
② 包法：將紙條一端折進約3 cm 長使成雙層，將吸管或滴管包進雙層紙內，并與紙條形成約30°夾角，然后在桌面上不停地卷動，讓紙條成螺旋狀包在管外，最后將多余的紙條回折即可。見圖11-3。
（2）培養(yǎng)皿的包裝：將潔凈干燥的培養(yǎng)皿裝入鐵皮箱，每箱60套，蓋好箱蓋即可。
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