實(shí)驗(yàn)之——植物RNA提取步驟！
小楊 / 2019-12-04 09:38:12
首次使用要加試劑：RNA wash buffer II 加48ml無水乙醇；RB buffer 每毫升加20μL2-mercaptoethanol (硫基乙醇)。
試劑使用順序：RB—RWF wash Buffer –RNA wash Buffer II---DEPC/ddH2O2（65℃預(yù)熱）；提前開水浴鍋65℃
1、100mg植物材料液氮研磨，加入到1.5ml 離心管；
2、迅速加入500μL RB buffer，旋渦震蕩至完全懸?。?br />
3、吸取液體過柱（gDNA 藍(lán)），室溫離心14000r，5min；（去除gDNA）
4、加入0.5倍體積的無水乙醇（約250μL）于過柱液體，吸打混勻；
5、吸取700μL過柱（RNA橙色），室溫離心12000r，1min；
6、棄掉濾液，將剩余液體加入吸附柱，12000r，1min； （可重復(fù)步驟5.6過柱一次 吸附RNA）
7、加入400μL RWF，10000r離心1min；
8、棄掉廢液，加入500μL wash buffer II，10000 r離心30s；
9、棄掉廢液，加入500μL wash buffer II，10000 r離心30s；
10、換新管，12000r空離2min；室溫晾干（濾膜干了就行，不能太久，過干難洗脫），去除乙醇
11、將過濾柱轉(zhuǎn)移至新1.5ml離心管，加入65℃預(yù)熱的DEPC/ ddH2O2水50-100ul （分2次加，每次25ul洗脫RNA）；，室溫2min；10000r離心2min
12、瓊脂糖凝膠電泳檢測RNA質(zhì)量，分光光度計(jì)檢測濃度及OD值；RNA儲(chǔ)存在-80℃。
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