國(guó)家對(duì)飲料中大腸桿菌的檢測(cè)方法-百歐博偉ATCC菌種
中國(guó)微生物菌種查詢(xún)網(wǎng) / 2018-09-13 09:15:26
國(guó)家對(duì)飲料中大腸桿菌的檢測(cè)方法-百歐博偉ATCC菌種
一、設(shè)備和材料
1 平皿：直徑90mm。
2 天平：感量0.1g。
3 顯微鏡。
4 稀釋瓶：100mL、200mL和500mL三角燒瓶及廣口瓶。
5 玻璃珠：直徑約5mm。
6 菌落計(jì)數(shù)器。
7 吸管: 1mL,具0.1mL刻度；5mL和10mL,具1mL刻度。
8 水浴箱：44.5±0.5℃。
9 培養(yǎng)箱：36±1℃,44.5±0.5℃。
10 冰箱: 0～5℃和-15～-20℃。
11 均質(zhì)器。
12 乳缽和研棒。
二、樣品制備
1、不同食品樣品勻液的制備
以無(wú)菌操作取有代表性的樣品。如有包裝則用75％乙醇在開(kāi)口處擦拭后取樣。若不能及時(shí)檢驗(yàn),應(yīng)將冷凍樣品置于-15℃保存；非冷凍而易腐的食品,應(yīng)置于4℃冰箱保存。檢驗(yàn)前冷凍樣品可于2～5℃ 18h內(nèi)解凍,或在45℃以下15min內(nèi)解凍。
2、固體和半固體食品
以無(wú)菌操作取25 g樣品,放入裝有225 mL稀釋劑的滅菌均質(zhì)杯內(nèi),于8000 r/min均質(zhì)1～2min,制成1:10樣品勻液(也可用滅菌乳缽研磨的方法代替)。
以無(wú)菌操作取有代表性的樣品。如有包裝則用75％乙醇在開(kāi)口處擦拭后取樣。若不能及時(shí)檢驗(yàn),應(yīng)將冷凍樣品置于-15℃保存；非冷凍而易腐的食品,應(yīng)置于4℃冰箱保存。檢驗(yàn)前冷凍樣品可于2～5℃ 18h內(nèi)解凍,或在45℃以下15min內(nèi)解凍。
3、稀釋樣品勻液根據(jù)對(duì)樣品污染情況的估計(jì),用稀釋劑將樣品勻液制成一系列十倍遞增的樣品稀釋液,如10**-2、10**-3、10**-4……。從制備樣品勻液至稀釋完畢,全過(guò)程不得超過(guò)15min。
1 以無(wú)菌操作取有代表性的樣品。如有包裝則用75％乙醇在開(kāi)口處擦拭后取樣。若不能及時(shí)檢驗(yàn),應(yīng)將冷凍樣品置于-15℃保存；非冷凍而易腐的食品,應(yīng)置于4℃冰箱保存。檢驗(yàn)前冷凍樣品可于2～5℃ 18h內(nèi)解凍,或在45℃以下15min內(nèi)解凍。
三、大腸桿菌測(cè)定
1 將6.3條中的EC肉湯管繼續(xù)培養(yǎng)24h,取其產(chǎn)氣管的培養(yǎng)物劃線(xiàn)接種于伊紅美藍(lán)(EMB)平板,36±1℃培養(yǎng)24±2h。
2 檢查平板上有無(wú)具黑色中心有光澤或無(wú)光澤的典型菌落。
3 如有典型菌落,則從每個(gè)平板上至少挑取2個(gè)典型菌落；如無(wú)典型菌落,則從每個(gè)平板上至少挑取2個(gè)可疑菌落。用接種針接觸菌落中心部位,移種到營(yíng)養(yǎng)瓊脂斜面上,36±1℃培養(yǎng)18～24h。
4 將斜面培養(yǎng)物移種到下列培養(yǎng)基中進(jìn)行生化試驗(yàn)。
色氨酸肉湯：在36±1℃培養(yǎng)24±2h后,加Kovacs氏試劑0.2～0.3mL,上層出現(xiàn)紅色為靛基質(zhì)陽(yáng)性反應(yīng)。 MR-VP培養(yǎng)基：在36±1℃培養(yǎng)48±2h。以無(wú)菌操作移取培養(yǎng)物1 mL至13mm×100mm試管中,加5％α-萘酚乙醇溶液0.6mL,40％氫氧化鉀溶液0.2mL和少許肌酸結(jié)晶,振搖試管后靜置2h,如出現(xiàn)伊紅色,為VP試驗(yàn)陽(yáng)性。
將MR-VP培養(yǎng)物的剩余部分再培養(yǎng)48h滴加5 滴甲基紅溶液。如培養(yǎng)物變紅色,為甲基紅試驗(yàn)陽(yáng)性,若變黃色則為陰性反應(yīng)。
Koser氏枸椽酸鹽肉湯：于36±1℃培養(yǎng)96h記錄有無(wú)生長(zhǎng)。
LST肉湯：于36±1℃培養(yǎng)48±2h,觀(guān)察試管中是否產(chǎn)氣。
革蘭氏染色：取18h營(yíng)養(yǎng)瓊脂斜面培養(yǎng)物作革蘭氏染色。大腸桿菌為革蘭氏陰性。
大腸桿菌與非大腸桿菌生化鑒別如下圖：
如出現(xiàn)上表以外的生化反應(yīng)類(lèi)型,表明培養(yǎng)物可能不純,應(yīng)重新劃線(xiàn)分離,必要時(shí)做重復(fù)試驗(yàn)。
5 結(jié)果報(bào)告：大腸桿菌為革蘭氏陰性無(wú)芽孢桿菌,發(fā)酵乳糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣,IMViC試驗(yàn)為＋＋－－或－＋－－,再根據(jù)LST肉湯陽(yáng)性管數(shù)查MPN表,報(bào)告每克(毫升)樣品中大腸桿菌MPN值。