微生物實驗檢測中無菌取樣的核心原則及操作規(guī)范與要點！
小楊 / 2025-07-07 10:05:43
百歐博偉生物：“無菌取樣”是指在獲取樣品（如微生物檢測樣品、無菌產(chǎn)品、細胞培養(yǎng)物等）的過程中，嚴格防止任何外來微生物污染樣品的操作方法和過程。其核心目標是確保所取樣品能夠真實反映其原始狀態(tài)下的微生物狀況（無論是有菌還是無菌），避免因取樣操作本身引入污染而導致錯誤的檢測結(jié)果或產(chǎn)品污染。
一、無菌取樣的核心原則：
1、防止污染：這是最根本的原則。所有操作都要圍繞避免環(huán)境中、操作者身上或取樣工具上的微生物進入樣品。
2、使用無菌器具：所有直接接觸樣品的工具（如注射器、針頭、鑷子、剪刀、取樣勺、拭子、培養(yǎng)皿、試管、容器等）必須經(jīng)過有效的滅菌處理（如高壓蒸汽滅菌、干熱滅菌、環(huán)氧乙烷滅菌或無菌一次性使用），并在使用前保持其無菌狀態(tài)。
3、無菌環(huán)境/區(qū)域：取樣應在盡可能潔凈的環(huán)境中進行。理想情況下應在專門的潔凈室、生物安全柜或超凈工作臺內(nèi)操作。如果在現(xiàn)場或非受控環(huán)境取樣，需采取額外防護措施（如使用火焰屏障、無菌罩等）。
4、操作者無菌操作：
操作人員需穿戴干凈的工作服（最好是無菌服）、口罩、帽子。
操作前必須嚴格、規(guī)范地洗手和消毒（通常使用70-75%酒精或?qū)Ｓ孟緞?/div>
操作時需佩戴無菌手套，并在整個關(guān)鍵操作過程中保持手套的無菌性（避免觸碰非無菌表面）。
動作要準確、迅速、輕柔，減少空氣流動和產(chǎn)生氣溶膠。
避免對著樣品說話、咳嗽或打噴嚏。
5、無菌技術(shù)：
火焰滅菌：在無菌區(qū)域外操作時，常使用酒精燈或本生燈對工具（如鑷子、剪刀、容器口）進行火焰滅菌。
避免交叉污染：無菌器具只能接觸無菌物品或樣品本身，接觸后即視為有污染風險，不可再直接接觸其他無菌物品。
最小化暴露：無菌容器僅在需要放入樣品時才打開，打開后應盡量保持容器口向下或處于保護狀態(tài)（如在火焰附近），并盡快關(guān)閉。
無菌轉(zhuǎn)移：樣品從一個無菌容器轉(zhuǎn)移到另一個時，需確保轉(zhuǎn)移路徑和工具的無菌性。
二、無菌取樣的關(guān)鍵步驟：
1、準備：
明確取樣目的、樣品類型和所需體積/數(shù)量。
準備并確認所有所需無菌器具、容器、運輸介質(zhì)（如適用）均已滅菌且在有效期內(nèi)。
穿戴好個人防護裝備（PPE），并進行手部消毒。
準備好消毒劑用于樣品接觸點的消毒。
設定好無菌工作區(qū)域（如開啟超凈臺/生物安全柜并運行足夠時間）。
2、取樣點消毒（如適用）：對于需要從特定表面或開口（如瓶口、罐口、管道接口、皮膚穿刺點）取樣的，必須先用合適的消毒劑對接觸點進行徹底消毒，并等待其完全干燥，以避免消毒劑殘留抑制微生物或污染樣品。
3、取樣操作：
在無菌區(qū)域（如超凈臺內(nèi)）或嚴格遵守無菌操作規(guī)范進行。
打開無菌容器或包裝時，注意手法，避免手或非無菌物品接觸內(nèi)部或邊緣。
使用無菌工具（鑷子、注射器、拭子等）獲取樣品。
操作迅速、準確，避免工具或樣品在空氣中暴露過久。
避免手部或非無菌物體越過打開的容器或樣品上方。
取樣工具只能接觸樣品一次，如需再次取樣，應更換新工具。
4、樣品封裝：
將取得的樣品立即、小心地放入無菌容器中。
確保容器密封良好，防止泄漏和后續(xù)污染。
在容器上清晰、準確地標記樣品信息（如樣品編號、名稱、取樣日期時間、取樣人、取樣位置等）。
5、運輸與儲存：
根據(jù)樣品特性和檢測要求，在規(guī)定的條件下（如冷藏、冷凍、常溫避光）及時運輸?shù)綄嶒炇摇?/div>
使用合適的運輸容器（如保溫箱+冰袋），確保運輸過程不會破壞樣品的無菌狀態(tài)或影響目標微生物的存活。
6、記錄：
詳細記錄取樣過程，包括取樣時間、地點、方法、使用的器具、消毒方法、操作人員、環(huán)境條件（如潔凈度級別）、樣品標識、運輸條件等。這對于結(jié)果追溯和質(zhì)量控制至關(guān)重要。
三、應用場景舉例：
醫(yī)療：采集血液、腦脊液、尿液、膿液、組織活檢樣本用于微生物培養(yǎng)。
制藥：在生產(chǎn)過程中或最終產(chǎn)品中取樣進行無菌檢查、微生物限度檢查、內(nèi)毒素檢測。
生物制品/細胞治療：細胞培養(yǎng)物的傳代、凍存或檢測取樣。
食品與飲料：原料、生產(chǎn)線（設備表面、中間產(chǎn)品、水、空氣）、成品的微生物檢測取樣。
化妝品：成品或原料的微生物檢測取樣。
環(huán)境監(jiān)測：潔凈室/區(qū)的空氣、表面、人員（接觸碟）的微生物監(jiān)測取樣。
科研：無菌動物實驗、無菌培養(yǎng)基配制、分子生物學實驗（避免DNA酶/RNA酶污染也類似無菌概念）。
四、總結(jié)：
無菌取樣是一項需要高度嚴謹性、規(guī)范操作和豐富經(jīng)驗的技術(shù)。它要求操作者深刻理解無菌概念，熟練掌握無菌操作技術(shù)，并在每個細節(jié)上都嚴格遵守規(guī)程。任何環(huán)節(jié)的疏忽都可能導致取樣失敗，得到不可靠的結(jié)果，甚至造成嚴重后果。因此，接受專業(yè)培訓、遵循標準操作規(guī)程（SOP）并進行充分的實踐是保證無菌取樣成功的關(guān)鍵。
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