實驗室微生物樣品的取樣方法與取樣要求及核心原則！
小楊 / 2025-06-12 10:08:20
百歐博偉生物：微生物樣品的取樣是微生物檢測的關(guān)鍵第一步，直接影響結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性。不規(guī)范的取樣會導(dǎo)致整個檢測過程失去意義。以下詳細(xì)說明微生物樣品的取樣方法及要求：
一、核心原則
1、無菌原則：這是微生物取樣的首要原則。整個取樣過程必須防止樣品被外源微生物污染，同時也要防止樣品中的微生物污染環(huán)境或人員。
2、代表性原則：所取樣品必須能代表被檢測的整批物料、環(huán)境或特定目標(biāo)區(qū)域。
3、及時性原則：取樣后應(yīng)盡快進(jìn)行檢測或采取適當(dāng)措施（如低溫保存）抑制微生物生長/死亡，保證樣品在檢測前的狀態(tài)盡可能接近取樣時。
4、安全性原則：取樣人員需做好個人防護(hù)，避免被病原微生物感染，同時防止樣品泄露污染環(huán)境。對于已知或疑似高致病性微生物樣品，需在相應(yīng)生物安全級別下操作。
5、可追溯性原則：詳細(xì)記錄取樣信息，確保樣品可追溯。
二、取樣前準(zhǔn)備
1、制定取樣計劃：
明確檢測目的（如：常規(guī)監(jiān)測、污染調(diào)查、驗證等）。
確定取樣對象（水、食品、藥品、環(huán)境表面、空氣、臨床標(biāo)本等）。
根據(jù)檢測標(biāo)準(zhǔn)、法規(guī)要求或研究目的，確定取樣點(diǎn)、取樣量、取樣頻率、取樣方法。
進(jìn)行合理的抽樣設(shè)計（隨機(jī)抽樣、分層抽樣、系統(tǒng)抽樣等），確保代表性。
2、準(zhǔn)備取樣工具和容器：
無菌：所有直接接觸樣品的工具（如取樣勺、鑷子、剪刀、注射器、吸管、拭子）和容器（如樣品袋、樣品瓶、試管）必須預(yù)先滅菌（常用干熱、濕熱、輻照滅菌法），并在無菌狀態(tài)下運(yùn)輸和開啟。
適用性：材質(zhì)應(yīng)對微生物無毒、不吸附目標(biāo)微生物（如塑料優(yōu)于玻璃，尤其對于病毒）。容器應(yīng)密封良好，防滲漏。
標(biāo)簽：準(zhǔn)備防水、不易脫落的標(biāo)簽。
保護(hù)套/包裝：用于保護(hù)無菌取樣工具（如注射器針帽、無菌袋）。
3、準(zhǔn)備運(yùn)輸容器：
根據(jù)樣品特性和檢測項目要求，準(zhǔn)備保溫箱（冷藏箱或保溫箱），內(nèi)置足夠的冷凍劑（冰袋、干冰等）或溫度維持材料，確保樣品在運(yùn)輸過程中維持規(guī)定的溫度（通常0-4°C冷藏，特殊樣品如病毒可能需-70°C或液氮）。
運(yùn)輸容器應(yīng)堅固、防震、防漏。
4、準(zhǔn)備記錄表格：設(shè)計并打印好取樣記錄單。
5、人員準(zhǔn)備：
取樣人員需經(jīng)過培訓(xùn)，熟悉取樣程序、無菌操作技術(shù)和安全防護(hù)要求。
穿戴適當(dāng)?shù)膫€人防護(hù)裝備：無菌手套、口罩、帽子、防護(hù)服（必要時穿無菌服）、護(hù)目鏡（必要時）等。進(jìn)入潔凈區(qū)需遵守更嚴(yán)格的更衣程序。
手部清潔與消毒：取樣前必須徹底洗手，并用75%酒精或其他有效消毒劑消毒雙手。更換手套時需重新消毒手。
三、取樣方法（根據(jù)樣品類型）
1、液體樣品 (水、飲料、液態(tài)奶、尿液、體液等)：
方法：充分混勻樣品（避免產(chǎn)生氣泡）。用無菌注射器、移液器或虹吸裝置吸取規(guī)定體積。對于開放水體，應(yīng)在規(guī)定深度取樣。
容器：無菌玻璃瓶或塑料瓶（帶螺旋蓋或密封墊）。
要求：取樣時避免接觸容器口及內(nèi)壁。瓶內(nèi)留適當(dāng)頂空（約10%）。某些檢測（如揮發(fā)性酸）需裝滿無頂空。水樣檢測余氯時，取樣瓶需提前加入硫代硫酸鈉中和余氯。
2、固體或半固體樣品 (食品、土壤、糞便、組織、藥膏等)：
方法：
無菌勺/鑷子/刀：在樣品不同部位多點(diǎn)取樣，混合后取代表性部分裝入無菌袋或瓶中。對于大塊樣品，需先無菌切開，取內(nèi)部和表面部分。
均質(zhì)法：將定量樣品（如25g）加入含適量無菌稀釋液（如緩沖蛋白胨水）的無菌均質(zhì)袋中，用拍打式均質(zhì)器拍打1-2分鐘，制成均勻的1:10初始懸浮液，用于后續(xù)檢測。此法最常用，分散效果好。
研磨法：少量堅硬樣品可在無菌研缽中研磨后轉(zhuǎn)移。
拭子法 (表面取樣)：見下文。
容器：無菌廣口瓶、無菌密封袋（帶濾膜或均質(zhì)袋）。
要求：確保工具足夠深入取樣點(diǎn)，保證代表性。避免樣品在取樣過程中融化或溫度升高。
3、表面樣品 (設(shè)備、器具、工作臺、手部等)：
方法：
接觸碟法：將裝有固體培養(yǎng)基的平皿直接壓觸在平整表面規(guī)定時間（通常10-60秒），蓋上蓋子培養(yǎng)。適用于平整規(guī)則表面。
棉拭子/海綿拭子法：
用無菌拭子蘸取適量無菌稀釋液或轉(zhuǎn)運(yùn)液，在規(guī)定的取樣面積內(nèi)用力、均勻擦拭，水平、垂直方向反復(fù)多次。
將拭子頭剪入或直接放入含適量無菌稀釋液/轉(zhuǎn)運(yùn)液的試管中，充分振蕩洗脫。
海綿拭子適用于大表面或不平整表面，吸附量更大。
沖洗法：向設(shè)備腔體（如管道、罐）內(nèi)注入定量無菌稀釋液，充分震蕩或循環(huán)沖洗，收集沖洗液作為樣品。
要求：明確標(biāo)示取樣區(qū)域。接觸碟法需確保培養(yǎng)基表面完全接觸。拭子法需保證擦拭力度、覆蓋面和濕潤度。
4、空氣樣品：
方法：
沉降碟法 (被動沉降)：將裝有固體培養(yǎng)基的平皿打開，在規(guī)定高度和位置暴露規(guī)定時間（通常30分鐘至4小時），蓋上蓋子培養(yǎng)。計算沉降菌落數(shù)。
撞擊法 (主動采樣)：使用空氣采樣器（如裂隙式、離心式、液體沖擊式），將空氣以一定流速撞擊到培養(yǎng)基表面或液體中，捕獲空氣中的粒子。結(jié)果以CFU/m³表示。
要求：根據(jù)潔凈級別要求選擇方法。采樣點(diǎn)、高度、時間、流量需按標(biāo)準(zhǔn)設(shè)定。避免氣流干擾。
5、臨床標(biāo)本 (痰、膿液、血液、腦脊液等)：
方法：嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作和生物安全規(guī)范。由專業(yè)醫(yī)護(hù)人員采集。
血液/體液：無菌穿刺采集，注入無菌血培養(yǎng)瓶（需氧/厭氧）或試管。
痰液：指導(dǎo)患者深咳取清晨痰。
拭子 (咽拭子、鼻拭子、傷口拭子)：使用專用轉(zhuǎn)運(yùn)拭子，在病灶處用力旋轉(zhuǎn)涂抹。
容器：專用無菌容器、血培養(yǎng)瓶、含轉(zhuǎn)運(yùn)介質(zhì)的拭子管。
要求：采集時機(jī)（如用藥前）、部位、方法對結(jié)果影響極大。需快速送檢，某些樣品需保溫。
四、取樣要求（關(guān)鍵控制點(diǎn)）
1、無菌操作：
取樣環(huán)境應(yīng)盡可能清潔（在超凈工作臺或生物安全柜內(nèi)進(jìn)行最佳）。
開啟無菌容器前，用75%酒精擦拭外表面。
無菌工具和容器只能接觸樣品，避免觸碰非無菌表面。
取樣過程中動作迅速、準(zhǔn)確，盡量減少樣品在空氣中的暴露時間。
2、防止交叉污染：
不同樣品或不同取樣點(diǎn)之間，必須更換無菌工具和手套。
避免取樣工具接觸容器口。
3、樣品標(biāo)識：
立即在容器上粘貼牢固標(biāo)簽，清晰標(biāo)注（至少包含）：
樣品唯一編號
樣品名稱/描述
取樣日期和時間
取樣地點(diǎn)/具體位置
取樣人
檢測項目（如適用）
任何特殊處理（如添加中和劑）
填寫詳細(xì)的取樣記錄單（包括以上信息及環(huán)境條件如溫度、濕度等）。
4、樣品量：必須滿足檢測方法要求的最小量，并考慮可能的復(fù)測需求。
5、溫度控制：
對溫度敏感的樣品（絕大多數(shù)微生物樣品），取樣后應(yīng)立即放入預(yù)冷的保溫箱（0-4°C），在運(yùn)輸和儲存過程中維持冷藏（除非特定微生物要求在室溫或更高溫度下運(yùn)輸，如某些寄生蟲）。
冷凍樣品應(yīng)保持冷凍狀態(tài)（通常-18°C以下，特殊要求如-70°C）。
記錄取樣時樣品溫度（如可能）和運(yùn)輸過程中的溫度。
6、密封性：確保容器密封良好，防止泄漏、污染和水分蒸發(fā)。
7、運(yùn)輸時限：取樣后應(yīng)盡快送抵實驗室。通常要求冷藏樣品在24-48小時內(nèi)檢測。具體時限依據(jù)樣品類型、檢測項目、保存條件和標(biāo)準(zhǔn)要求確定。某些樣品（如病毒、厭氧菌）要求更短時限。
8、運(yùn)輸條件：使用合適的運(yùn)輸容器和足夠的冷凍劑，確保溫度符合要求。運(yùn)輸過程應(yīng)避免劇烈震蕩、陽光直射。符合生物安全要求的樣品需三層包裝（主容器、輔助容器、外包裝），并附有運(yùn)輸文件。
五、特殊考慮
厭氧菌取樣：需使用專門的無氧轉(zhuǎn)運(yùn)裝置或培養(yǎng)基，盡量減少樣品暴露于空氣的時間。
病毒取樣：通常使用專用病毒轉(zhuǎn)運(yùn)培養(yǎng)基，嚴(yán)格低溫（干冰或液氮）保存運(yùn)輸。
揮發(fā)性樣品：容器應(yīng)裝滿無頂空。
高酸/高堿/高滲樣品：取樣后可能需要立即中和或調(diào)節(jié)滲透壓。
輻照/輻解敏感樣品：避免使用輻照滅菌的容器（如必須，需驗證無影響）。
六、取樣記錄
必須詳細(xì)、準(zhǔn)確、及時地記錄所有取樣信息，至少包括：
取樣計劃編號/名稱
樣品編號
樣品名稱和描述
取樣日期和時間
精確的取樣地點(diǎn)（如設(shè)備編號、房間號、坐標(biāo)、深度等）
取樣方法
取樣量
取樣人
環(huán)境條件（溫度、濕度等）
觀察到的任何異常情況
使用的取樣工具和容器類型
保存方式和運(yùn)輸要求
預(yù)定檢測項目
記錄應(yīng)清晰、不易涂改，并妥善保存。
七、常見錯誤
未遵循無菌操作，導(dǎo)致污染。
取樣點(diǎn)/方法不具有代表性。
樣品量不足。
標(biāo)識不清或錯誤。
容器選擇不當(dāng)或未滅菌。
未及時冷藏或冷凍。
運(yùn)輸時間過長或溫度失控。
記錄不完整或不準(zhǔn)確。
個人防護(hù)不到位。
總結(jié)：微生物取樣是一項技術(shù)性很強(qiáng)的工作，必須嚴(yán)格遵守?zé)o菌原則、代表性原則和相關(guān)的標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程(SOP)。充分的準(zhǔn)備、規(guī)范的操作、準(zhǔn)確的記錄和適當(dāng)?shù)谋４孢\(yùn)輸是保證后續(xù)微生物檢測結(jié)果準(zhǔn)確可靠的前提。務(wù)必根據(jù)具體的樣品類型和檢測目的，參考相應(yīng)的國家標(biāo)準(zhǔn)、行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)、藥典或企業(yè)內(nèi)部規(guī)定進(jìn)行操作。記?。豪M(jìn)（取樣不規(guī)范），垃圾出（結(jié)果不可靠）。
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