無菌細(xì)胞培養(yǎng)環(huán)境的實(shí)驗(yàn)設(shè)施與操作規(guī)范及防控措施！
小楊 / 2025-05-14 10:14:16
百歐博偉生物：建立無菌無毒的細(xì)胞培養(yǎng)環(huán)境是細(xì)胞實(shí)驗(yàn)成功的關(guān)鍵，需從設(shè)施、操作、試劑及人員管理等多方面綜合控制。以下是具體要求和措施：
一、實(shí)驗(yàn)設(shè)施與環(huán)境
1、無菌操作區(qū)
超凈工作臺(tái)/生物安全柜：所有細(xì)胞操作需在經(jīng)高效空氣過濾器凈化的超凈臺(tái)或生物安全柜內(nèi)進(jìn)行，確?？諝鉄o菌。
定期消毒：操作前后用75%乙醇擦拭臺(tái)面，紫外線照射30分鐘以上（注意紫外線對(duì)皮膚和細(xì)胞的損傷）。
2、實(shí)驗(yàn)室分區(qū)
獨(dú)立區(qū)域：劃分清潔區(qū)（細(xì)胞操作區(qū)）、半污染區(qū)（試劑準(zhǔn)備區(qū)）和污染區(qū)（廢物處理區(qū)），避免交叉污染。
空氣控制：實(shí)驗(yàn)室需維持正壓環(huán)境，配備空氣過濾系統(tǒng)，定期更換濾膜。
3、溫濕度控制
溫度穩(wěn)定在25±2℃，濕度40%-60%，減少微生物滋生。
二、器具與試劑滅菌
1、培養(yǎng)器具處理
高壓蒸汽滅菌：玻璃器皿、金屬工具等需121℃、15-30分鐘高壓滅菌。
干熱滅菌：160℃、2小時(shí)處理耐高溫物品。
一次性耗材：優(yōu)先使用預(yù)滅菌的離心管、培養(yǎng)皿等。
2、培養(yǎng)基與試劑
無菌分裝：試劑分裝后標(biāo)注日期，避免反復(fù)凍融污染。
三、無菌操作規(guī)范
1、人員防護(hù)
穿戴實(shí)驗(yàn)服、口罩、手套及帽子，操作前用75%乙醇消毒雙手。
禁止在操作區(qū)說話、咳嗽或快速移動(dòng)手臂，減少氣流擾動(dòng)。
2、操作流程
開啟超凈臺(tái)風(fēng)機(jī)10-15分鐘后再開始操作。
試劑瓶開啟前用乙醇灼燒瓶口，瓶蓋內(nèi)面朝上放置。
移液器吸頭避免觸碰非無菌表面，液體轉(zhuǎn)移時(shí)斜持瓶身減少空氣接觸。
3、污染監(jiān)控
定期檢測(cè)：對(duì)培養(yǎng)基、PBS等留樣進(jìn)行微生物培養(yǎng)（37℃培養(yǎng)48小時(shí)），確認(rèn)無菌。
細(xì)胞觀察：每日顯微鏡檢查細(xì)胞狀態(tài)，發(fā)現(xiàn)渾濁、pH異常立即丟棄。
四、污染防控措施
1、交叉污染預(yù)防
不同細(xì)胞系分開操作，使用獨(dú)立培養(yǎng)箱或分層放置。
細(xì)胞凍存時(shí)標(biāo)注名稱、日期，避免混淆。
2、消毒與廢棄物處理
廢液加入1%次氯酸鈉浸泡后丟棄，污染器械高壓滅菌處理。
定期用0.1%新潔爾滅或過氧化氫霧化消毒實(shí)驗(yàn)室。
五、人員培訓(xùn)與管理
1、規(guī)范培訓(xùn)
實(shí)驗(yàn)人員需通過無菌操作考核，熟悉應(yīng)急預(yù)案（如支原體污染處理）。
建立SOP（標(biāo)準(zhǔn)操作程序），明確消毒頻率、設(shè)備維護(hù)流程。
2、記錄與追溯
記錄細(xì)胞來源、傳代次數(shù)、操作人員及異常事件，便于污染溯源。
六、常見污染源及應(yīng)對(duì)
細(xì)菌/真菌：培養(yǎng)基渾濁，需丟棄并徹底消毒。
支原體：使用支原體檢測(cè)試劑盒，污染后建議廢棄細(xì)胞系。
交叉污染：STR鑒定細(xì)胞株，規(guī)范操作流程。
通過以上措施，可最大限度降低污染風(fēng)險(xiǎn)，為細(xì)胞提供穩(wěn)定的生長環(huán)境。關(guān)鍵點(diǎn)在于嚴(yán)格的無菌意識(shí)、規(guī)范的流程執(zhí)行以及系統(tǒng)性環(huán)境管理。
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