細胞培養(yǎng)中支原體污染現(xiàn)象與檢測方法及處理與預(yù)防措施！
小楊 / 2025-03-21 09:59:32
百歐博偉生物：細胞培養(yǎng)中的支原體污染是實驗室中常見且具有挑戰(zhàn)性的問題。支原體（Mycoplasma）是一類微小的原核生物，缺乏細胞壁，對常規(guī)抗生素（如青霉素）不敏感，因此污染后難以清除且容易被忽視。
以下是關(guān)于支原體污染的詳細解析：
一、支原體污染的特點
1、隱蔽性強：支原體直徑僅0.2-0.3 μm，可通過常規(guī)濾膜（如0.22 μm濾器），污染初期無明顯細胞形態(tài)變化。
2、代謝干擾：支原體依賴宿主細胞獲取營養(yǎng)，長期污染會改變細胞代謝，導致生長緩慢、基因表達異?；?qū)嶒灲Y(jié)果偏差。
3、傳播途徑廣：
人員操作：實驗人員攜帶（如唾液、皮膚接觸）；
試劑污染：血清、培養(yǎng)基或消化酶被污染；
交叉污染：已污染的細胞系傳播至其他培養(yǎng)物。
二、污染的可能表現(xiàn)
1、直接觀察：
細胞狀態(tài)逐漸變差（如生長遲緩、貼壁性下降）；
培養(yǎng)液輕微渾濁（需與細菌污染區(qū)分）；
細胞核異常（如碎片增多、核周空泡）。
2、間接影響：
實驗數(shù)據(jù)異常（如轉(zhuǎn)染效率下降、凋亡率升高）；
細胞周期或代謝相關(guān)實驗結(jié)果不可重復。
三、檢測方法
1、PCR法：特異性引物擴增支原體DNA（如16S rRNA基因），靈敏度高，可快速檢測（常用商業(yè)試劑盒）。
2、熒光染色法：Hoechst 33258染色后熒光顯微鏡觀察，支原體附著在細胞表面呈細小藍色顆粒。
3、培養(yǎng)法：將樣本接種于支原體專用培養(yǎng)基，耗時較長（數(shù)周），但特異性高。
4、ELISA或電鏡：較少常規(guī)使用，適用于特定研究。
四、污染處理措施
1、立即隔離：將污染細胞與其他培養(yǎng)物分開，避免交叉污染。
2、徹底清除：
丟棄污染細胞：建議直接廢棄珍貴性不高的污染細胞；
抗生素處理：使用支原體特異性抗生素（如Plasmocin™、BM-Cyclin），需注意：
治療周期長（2-3周），可能誘導細胞應(yīng)激；
無法100%清除，需后續(xù)嚴格檢測。
3、環(huán)境消毒：用支原體殺滅劑（如Mynox®）處理培養(yǎng)箱、超凈臺等。
五、預(yù)防策略
1、嚴格無菌操作：
佩戴口罩和手套，避免說話或觸碰培養(yǎng)液；
定期更換水浴鍋中的水，并添加抑菌劑。
2、試劑質(zhì)量控制：
選擇經(jīng)過支原體檢測的血清和培養(yǎng)基；
分裝試劑，避免反復凍融污染。
3、定期檢測：
新購入細胞系必須檢測；
每1-2個月對常用細胞進行抽檢。
4、細胞庫管理：
凍存原始細胞種子庫，避免長期傳代增加污染風險；
新細胞系需在獨立培養(yǎng)箱中隔離培養(yǎng)1個月。
六、支原體污染的潛在后果
科研影響：導致實驗結(jié)果不可靠或數(shù)據(jù)發(fā)表后被質(zhì)疑；
經(jīng)濟損失：污染可能導致珍貴細胞系丟失或?qū)嶒炛貜停?/div>
生物安全風險：某些支原體（如M. fermentans）可能對人體有害。
七、總結(jié)
支原體污染是細胞培養(yǎng)中的“隱形殺手”，防控需結(jié)合嚴格的操作規(guī)范、定期檢測和實驗室管理。一旦發(fā)現(xiàn)污染，需果斷處理并追溯污染源。建議實驗室建立標準操作流程（SOP），并培訓人員提高防范意識。對于關(guān)鍵實驗，可考慮使用支原體檢測陰性的認證細胞系（如ATCC提供的細胞）。
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