細菌凍存液的作用與應用及使用注意事項有哪些？
小楊 / 2024-05-28 09:06:01
一、背景
細菌凍存液是一種專門用于冷凍保存各種常見細菌的試劑。其有效成分為甘油，具有保護細菌在低溫冷凍條件下存活的作用。根據(jù)品牌和規(guī)格的不同，細菌凍存液的保存條件和保存時間也有所差異。一般來說，在-20℃條件下，細菌凍存液可以保存菌種12個月，而在-70℃或-80℃條件下則可以長期保存。
細菌凍存液是專門用于保存細菌的溶液，它可以使細菌在低溫下長期保持活性。
細菌凍存液的主要作用是在低溫條件下保護細菌免受損害，使其能夠在解凍后仍然保持原有的生物學特性和活性。這種液體通常含有防凍劑和其他添加劑，如DMSO（二甲基亞砜）或甘油，這些成分可以防止細胞在冷凍過程中因水分結晶而受損。使用細菌凍存液時，通常將待保存的細菌沉淀重懸于凍存液中，然后將其存放在-20℃或-80℃的條件下，以實現(xiàn)短期或長期保存。
此外，在使用細菌凍存液時，需要遵循一定的操作步驟，以確保細菌的活性。首先，將細菌接種于肉湯培養(yǎng)基中，在適宜的溫度下培養(yǎng)至適當?shù)纳L階段。然后，將細菌與等體積的凍存液混合，并分裝到凍存管中。最后，將凍存管放入-20℃或-80℃的冰箱中保存。需要注意的是，凍存液應避免反復凍融，以免影響細菌的存活率。
二、使用細菌凍存液時，需要注意以下幾點
細菌凍存液必須在超凈臺內使用，以避免雜菌污染。
細菌凍存液必須與細菌混勻，否則無法起到在低溫冷凍條件下對細菌的保護作用。
新鮮的對數(shù)期細菌凍存效果最好，但非對數(shù)期的或不是新鮮培養(yǎng)的細菌也可以用細菌凍存液冷凍保存。
為了安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
總的來說，細菌凍存液是微生物學和生物實驗室中不可或缺的試劑，能夠有效地保持細菌的活性和穩(wěn)定性，為科研和實驗工作提供便利。但使用時也需遵循一定的規(guī)范和注意事項，以確保實驗結果的準確性和可靠性。
請注意，不同品牌或類型的細菌凍存液可能具有不同的成分和使用方法，因此在具體使用時，應參考產(chǎn)品說明書或咨詢專業(yè)人士的建議。此外，細菌凍存液的處理和保存也需遵循相關生物安全規(guī)定，以防止對環(huán)境和人員造成危害。
三、應用
細菌凍存液可以用于幽門螺桿菌黏附素BabA蛋白結合區(qū)特征及其作用分析：
對crown區(qū)β折疊中的氨基酸及其之間形成的氫鍵進行分析,在保留黏附相關空間結構的前提下尋找相對分子量更小的蛋白,本部分體外克隆表達三種蛋白:BabA蛋白(BabA蛋白胞外段,即刪除信號肽部分的全長蛋白)、Crown蛋白(BabA蛋白crown區(qū))、C51蛋白(crown區(qū)截短蛋白)。與Crown蛋白相比,C51蛋白中減少了23個氨基酸,其中11個氨基酸位于β片層中,12個氨基酸位于β片層一側的環(huán)狀結構中。
通過生物膜干涉技術分析三種蛋白與受體Lewis b的結合力,BabA、Crown和C51與Lewis b的結合親和力(Kd)分別為12.1μM、213μM和241μM,說明三個蛋白均能與Lewisb結合,Crown和C51蛋白的受體結合力均低于BabA蛋白。通過流式細胞術檢測三種蛋白對H.pylori J99與AGS細胞黏附的影響,結果顯示,BabA和Crown蛋白分別使J99的黏附數(shù)量降低了24.8%(P=0.009)和11.1%(P=0.024),而C51蛋白卻使AGS細胞表面J99的黏附數(shù)量增加了28.0%(P=0.001)。為了分析出現(xiàn)這種現(xiàn)象的原因,觀察三種蛋白對J99細菌凝集的影響,結果顯示在自然狀態(tài)下J99菌株基本呈均勻散在分布,加入C51蛋白后J99明顯凝集呈簇,而BabA和Crown蛋白未引起J99明顯凝集,這種凝集效應可能是C51蛋白使AGS細胞表面J99的黏附數(shù)量增加的原因。
實驗室使用細菌凍存液凍存和傳代菌株可能發(fā)生包括黏附能力及阿莫西林耐藥特征的改變,本研究對凍存前與凍存后的H.pylori進行轉錄組分析,發(fā)現(xiàn)下調基因在膜必需組分(GO:0016021)和質膜(GO:0005886)顯著富集,膜蛋白表達水平的變化可能與凍存后H.pylori阿莫西林耐藥性降低有關。在細菌凍存液凍存菌株中檢測到多種黏附素表達水平的改變,如SabA、AlpB等,但BabA表達水平未發(fā)生顯著改變,提示以BabA為靶點的抗H.pylori黏附作用的研究中,H.pylori菌株的選擇不受凍存因素的影響。
本研究通過組織芯片技術研究了胃癌病人胃黏膜中BabA受體的分布情況,首次對Crown蛋白(BabA蛋白crown區(qū))、C51蛋白(crown區(qū)截短蛋白)進行克隆表達,比較了三種不同分子量大小的蛋白(BabA、Crown、C51)與受體Lewis b的結合力,并評價了其對H.pylori與AGS細胞黏附的影響,增加了對H.pylori的黏附機制的理解,并為基于BabA蛋白的抗H.pylori藥物研究提供了理論基礎。通過轉錄組分析了細菌凍存液凍存可能對幽門螺桿菌的廣泛影響,發(fā)現(xiàn)對阿莫西林的耐藥水平和數(shù)種黏附素的表達水平有顯著影響,但對BabA表達無明顯影響,表明以BabA蛋白為基礎的抗黏附體外研究細菌-細胞作用模型具有可行性。
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