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PDA培養(yǎng)基的制作方法-百歐博偉生物
中國(guó)微生物菌種查詢網(wǎng) / 2019-01-11 09:16:01

      馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基是使用最頻繁的培養(yǎng)基,簡(jiǎn)稱PDA,主要用于真菌的分離和培養(yǎng),有時(shí)也用于植物病原細(xì)菌的培養(yǎng)。
    PDA培養(yǎng)基(馬鈴薯葡萄糖培養(yǎng)基)配方:去皮馬鈴薯200g 葡萄糖20g瓊脂15—20g蒸餾水1000ml 自然pH。在PDA培養(yǎng)基配方中也可用蔗糖代替葡萄糖,這樣配制的培養(yǎng)基也稱為PSA培養(yǎng)基。
  (1)稱量。稱量去皮馬鈴薯200g,葡萄糖20g,瓊脂15--20g。提示:瓊脂加入的量取決于瓊脂的質(zhì)量,質(zhì)量好的15g就夠了,質(zhì)量差的應(yīng)適當(dāng)增加。另外,在夏天氣溫較高時(shí),適當(dāng)增加用量。
  (2)將馬鈴薯切成小塊,放入鍋中,加水1000ml,煮沸20~30min。用紗布濾去馬鈴薯殘?jiān)?br />   (3)將馬鈴薯濾液放回鍋中,加入瓊脂,加熱熔化。
  提示:在瓊脂熔化的過(guò)程中,需要用玻璃棒不斷攪拌,并控制火力不要使培養(yǎng)基溢出或燒焦。
  (4)加入葡萄糖。葡萄糖溶解后,加入適量的水以補(bǔ)充加熱過(guò)程中損失的水分,定容至1000ml。
  提示:通常在制作培養(yǎng)基的鍋內(nèi)用紅藍(lán)鉛筆標(biāo)記出不同體積的刻度,如1000ml、2000ml等,在定容時(shí)直接將水加至已標(biāo)記的刻度即可。
  (5)分裝。根據(jù)不同的實(shí)驗(yàn)?zāi)康模蓪⑴渲频呐囵B(yǎng)基分裝于試管內(nèi)或三角瓶?jī)?nèi)。分裝試管,其量為管高的1/5,滅菌后制成斜面。分裝三角瓶的容量以不超過(guò)三角瓶容積之一半為宜。
  (6)加塞。在管口或瓶口塞上棉塞。棉塞要用未脫脂的經(jīng)彈松的棉花,棉塞可過(guò)濾空氣,防止雜菌侵入并可減緩培養(yǎng)基水分的蒸發(fā),故在植物病理學(xué)研究工作中普遍使用。
  正確的棉塞是形狀、大小、松緊與管口或瓶口完全適合,過(guò)緊時(shí)妨礙空氣流通,操作不便;過(guò)松則達(dá)不到濾菌的目的,且棉塞過(guò)小往往容易掉進(jìn)試管內(nèi)。正確的棉塞頭較大,約有1/3在外,2/3在試管內(nèi)。分裝過(guò)程中注意不要使培養(yǎng)基沾染在管(瓶)口上以免浸濕棉塞,引起污染。如不使用棉塞也可用橡皮塞或特制的金屬、塑料試管帽,為讓空氣可以自由進(jìn)出,橡皮塞不要過(guò)緊,滅菌前應(yīng)夾一紗線在管口。
  (7)包扎。加塞后,將試管用線繩捆好,再在棉塞外包一層牛皮紙,以防止滅菌時(shí)冷凝水潤(rùn)濕棉塞,其外再用一道線繩扎好。用記號(hào)筆注明培養(yǎng)基名稱、配制日期、組別、制作人等。 
  (8)滅菌。將上述培養(yǎng)基以0.103MPa,121℃,高壓蒸氣滅菌20~30min。可以用家用高壓鍋上汽后滅菌1小時(shí)。
  (9)擱置斜面。將滅菌的試管培養(yǎng)基冷至50℃左右(以防斜面上冷凝水太多),將試管口端擱在玻棒或其他合適高度的器具上,擱置的斜面長(zhǎng)度以不超過(guò)試管總長(zhǎng)的一半為宜。
  培養(yǎng)基經(jīng)滅菌后,必須放在37C溫箱培養(yǎng)24h,或常溫下放置幾天后無(wú)菌生長(zhǎng)者方可使用。PDA培養(yǎng)基一般不需要調(diào)pH。對(duì)于要調(diào)節(jié)pH的培養(yǎng)基,一般用pH試紙測(cè)定其pH。如果培養(yǎng)基偏酸或偏堿時(shí),可用lmol/LNaOH或lmol/LHCL溶液進(jìn)行調(diào)節(jié)。調(diào)節(jié)時(shí)應(yīng)逐滴加入NaOH或HCl溶液,防止局部過(guò)酸或過(guò)堿破壞培養(yǎng)基成分。
  提示:pH不要調(diào)過(guò)頭,以避免回調(diào)而影響培養(yǎng)墓內(nèi)各離子的濃度。配制低pH的瓊脂培養(yǎng)基時(shí),若預(yù)先調(diào)好pH并在高壓蒸汽下滅菌,則瓊脂因水解不能凝固。因此,應(yīng)將培養(yǎng)基的成分和瓊脂分開(kāi)滅菌后再混合,或在中性pH條件下滅菌,再調(diào)整pH。

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