培養(yǎng)基的選擇及更換
中國微生物菌種查詢網(wǎng) / 2016-11-01 15:03:21
盡管絕大多數(shù)細胞系都可以在不止一種培養(yǎng)基內(nèi)生長，客戶既可以選用來自不同供應(yīng)商的商品化培養(yǎng)基，也可以使用自行配制的培養(yǎng)基。但是，值得注意的是，來自不同供應(yīng)商的培養(yǎng)基，即便是擁有類似甚至相同的名稱，配方及培養(yǎng)細胞的性能等方面也不盡相同。而自行配制的培養(yǎng)基，雖然成本很低，但是一方面配制比較繁瑣，費時費力。另一方面，配制完全培養(yǎng)基所需要的基礎(chǔ)培養(yǎng)基、細胞添加因子、血清等原材料極有可能存在批次間的差異，很難保證不同批次完全培養(yǎng)基的穩(wěn)定性。
此外，任何培養(yǎng)條件的改變都有可能造成細胞系特性的改變。因此，為保證整個實驗過程中細胞系的穩(wěn)定，建議從一開始就選用推薦使用的培養(yǎng)基、培養(yǎng)基添加物等培養(yǎng)體系進行培養(yǎng)。
在某些特殊情況下，如確實需要更換培養(yǎng)基，可按照以下步驟進行操作，逐步使細胞適應(yīng)新的培養(yǎng)基：
1.以1:2的傳代比例將細胞一分為二到兩個新的培養(yǎng)皿內(nèi)繼續(xù)培養(yǎng)，其中一個培養(yǎng)皿作為對照，繼續(xù)使用原來的培養(yǎng)基培養(yǎng)。另一個培養(yǎng)皿作為實驗組，使用新舊培養(yǎng)基按照1:1配比混合后的培養(yǎng)基培養(yǎng)。
注意：采用相對較低的傳代比例1:2進行傳代，目的是緩解傳代過程及新培養(yǎng)基給細胞生長帶來的雙重壓力。
2.分別監(jiān)測兩個培養(yǎng)皿內(nèi)細胞形態(tài)、生長速率等方面的變化。如果兩個培養(yǎng)皿內(nèi)的細胞沒有明顯差異，則接下來仍然按照1:2的傳代比例分別進行第二次傳代。對照組仍然使用舊的培養(yǎng)基培養(yǎng)，而實驗組則采用新舊培養(yǎng)基按照3:1配比混合（25%original,75%new）后的培養(yǎng)基培養(yǎng)。
3.繼續(xù)監(jiān)測兩個培養(yǎng)皿內(nèi)細胞形態(tài)、生長速率等方面的變化。如若兩者之間無明顯差異，則分別繼續(xù)進行第三次傳代。在第三次傳代時仍然按照1:2的傳代比例進行，實驗組使用新舊培養(yǎng)基按照7:1（12.5%original,87.5%new）配比混合的培養(yǎng)液培養(yǎng)。對照組仍使用舊的培養(yǎng)基培養(yǎng)。
4.繼續(xù)監(jiān)測實驗組和對照組細胞形態(tài)、生長速率等方面的變化。如若兩者之間仍然無明顯差異，則分別按照1:2的傳代比例繼續(xù)進行第四次傳代。此時，對照組仍使用舊的培養(yǎng)基培養(yǎng)，而實驗組則完全更換成新的培養(yǎng)基培養(yǎng)。此時，細胞應(yīng)該已經(jīng)完全適應(yīng)新的培養(yǎng)基了。
注：為確認細胞是否已經(jīng)完全適應(yīng)新的培養(yǎng)基，可以分別對兩組細胞進行功能性測試。如果在功能性測試過程中任何一個時候，實驗組表現(xiàn)與對照組不同，重復步驟2、3多傳幾代，直至與對照組細胞完全一致。
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