一、目的要求
1. 了解培養(yǎng)基配制原理，掌握其制備過程。
2．了解高壓蒸汽滅菌器的原理，掌握使用方法。
二、基本原理
1,培養(yǎng)基
? 培養(yǎng)基是人工配制的適合微生物生長繁殖和積累代謝產(chǎn)物所需要的營養(yǎng)基質(zhì)。
? 其中含有碳源、氮源、能源,無機鹽、生長因子以及水分。
? 微生物在培養(yǎng)基上生長繁殖還必須在最適酸堿度范圍內(nèi)才能表現(xiàn)它們最大生命力，因此不同種類的微生物應將培養(yǎng)基調(diào)到一定pH值范圍。
? 培養(yǎng)基種類很多，不同的微生物所需培養(yǎng)基不同。按其組成可分合成培養(yǎng)基和天然培養(yǎng)基和半合成培養(yǎng)基。按其物理狀態(tài)可分固體培養(yǎng)基，液體培養(yǎng)基和半固體培養(yǎng)基。按其特殊用途可分加富培養(yǎng)基，選擇培養(yǎng)基、鑒別培養(yǎng)基等。
2,滅菌
? 培養(yǎng)基配制后還必須進行滅菌。滅菌和消毒是二個不同含義的名詞。
? 消毒是指消滅病原菌或有害微生物，而滅菌則是殺死或消滅一定環(huán)境中的所有微生物。
? 消毒與滅菌的方法很多，但總的可分為物理法與化學法兩大類。物理法包括加熱滅菌（干熱滅菌與濕熱滅菌），過濾滅菌、紫外線滅菌等?；瘜W方法主要是利用有機或無機的化學藥品對實驗室用具和其它物體表面進行滅菌與消毒。
三、器材
? 藥品：按培養(yǎng)基配方（見附錄）把需藥品一一排好。1mol/L NaOH,1mol/L HCl。
? 其它：pH試紙；試管；三角瓶；量杯；量筒；漏斗；電爐；天平；棉花；紗布；牛皮紙；細繩子等及消毒滅菌用高壓蒸汽滅菌鍋。
四、操作步驟
? 1.稱量：按配方準確稱量并放入量杯中，（有些藥品需按配方說明先后加入）。
? 2.溶化：在量杯中加入所需水量（一般用自來水，特殊需用蒸餾水），攪勻，加熱溶解。
? 3.補水:按配方定容至所需體積。
? 4.調(diào)pH值：用pH試紙測pH，并用1mol/L NaOH或1mol/L HCl調(diào)節(jié)至所需pH范圍.
? 5.過濾：一般不過濾，特殊情況下需過濾，可用濾紙，紗布或脫脂棉等。
? 6.分裝：根據(jù)不同的需要，可將制好的培養(yǎng)基分裝入試管內(nèi)或三角瓶內(nèi)，管（瓶）口塞上棉塞。棉塞的總長度的3/5應在口內(nèi)，2/5口外。注意不要使培養(yǎng)基沾染在管（瓶）口上以免浸濕棉塞，引起污染。
? （1）液體：分裝高度以試管高度的1/4左右
? （2）固體：分裝試管，其量為管高的1/5，滅菌后制成斜面。分裝三角瓶的容量以不超過三角瓶容積之一半為宜。
? （3）半固體：分裝試管一般以試管高度的1/3為宜，滅菌后，垂直待凝成半固體深層瓊脂。
7.滅菌
? 培養(yǎng)基分裝好后，塞上棉塞，外面再包一牛皮紙，便可滅菌。滅菌的時間和溫度按各培養(yǎng)基規(guī)定進行，以保證滅菌效果和不損壞培養(yǎng)基的必要成分。
? 培養(yǎng)基經(jīng)滅菌后，可放在37恒溫箱培養(yǎng)24小時，無菌者方可使用，在實驗室里用得最多的加熱滅菌法是高壓蒸汽滅菌和干熱滅菌。目的都是使細菌體內(nèi)蛋白質(zhì)凝固變性而達到滅菌的目的.
? 一般培養(yǎng)基和滅菌水等用高壓蒸汽滅菌，而玻璃器皿常用干熱滅菌。
各組需要配置的培養(yǎng)基和需要滅菌的玻璃器皿
? 1,干熱滅菌
? 包扎培養(yǎng)皿14付(2包),1ml吸管6支至烘箱中進行干熱滅菌(1600C 2h);
? 2,制備培養(yǎng)基
? (1)1-4組制備普通營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基,每組300ml分裝于12支試管(滅菌后擺斜面)及2個錐形瓶;
? (2)5-8組制備EMB培養(yǎng)基,每組300ml分裝于2個錐形瓶,另12支9ml試管無菌水.