怎么證明菌種進行了傳代
中國微生物菌種查詢網(wǎng) 來源：網(wǎng) / 2016-09-27 08:47:56
1.菌種是從事微生物學及生命科學研究的基本材料，在醫(yī)學領域中，診斷制品的制備，菌苗的生產(chǎn)、微生物致病性研究，藥物的抑菌試驗及藥品微生物檢驗等都有一套完整的菌種.微生物具有生命活力，在傳代過程中易發(fā)生變異甚至死亡，因此菌種傳代與保藏是一項重要的基礎工作。
2.把凍干菌種管、滅菌1ml滴管、雙碟、鑷子、營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基、營養(yǎng)瓊脂斜面數(shù)支，移入接種室或凈化工作臺。
3.先用砂輪將凍干菌種安瓶頸部挫出刻痕,再將凍干菌種管外壁用75%乙醇擦洗消毒、稍干，用75%乙醇棉擦凈，放在滅菌雙碟內(nèi)，待干。點燃酒精燈，將菌種管的封口一端在火焰上，燒灼紅熱，滴在灼熱的菌種管封口一端，使驟冷而炸裂。
4.取滅菌鑷子，在火焰旁，將炸裂的管口打開，放入滅菌雙碟內(nèi)，另取1支滅菌滴管，在火焰旁吸取營養(yǎng)肉湯少許，加至菌種管底部，將凍干菌攪動促使溶解，隨即吸出管內(nèi)菌液，分別接種至營養(yǎng)瓊脂斜面及普通肉湯內(nèi)，并將滴管及菌種管投入消毒液內(nèi)，將已接種的營養(yǎng)肉湯及營養(yǎng)瓊脂斜面進行培養(yǎng)。
5.菌種斜面?zhèn)鞔僮?
6.培養(yǎng)基應新鮮制備，如斜面已無冷凝水者，不宜再使用。標簽上注明菌種名及菌種編號。至冰箱取出的菌種斜面，應在室溫放置約30分鐘，待溫度平衡后再移入接種室或超凈工作臺。
7.點燃酒精燈，用左手握住菌種斜面，將管口靠進火焰旁，右手拿接種棒后端，將接種環(huán)燒紅30秒，隨后將全部接種棒金屬部分在火焰上燒灼，往返通過3次。左手將管口在火焰上旋轉(zhuǎn)燒灼，右手用無名指、小指及掌部夾住棉塞，撥開棉塞，將接種環(huán)伸人管內(nèi)先在近壁的瓊脂斜面上靠一下，稍冷卻再移至菌苔上，刮去少量菌苔，隨即取出接種棒，并將菌種管口移至火焰旁。
8.堵上棉塞，左手將菌種管放下，取營養(yǎng)瓊脂斜面1支，照上述操作打開棉塞，將接種環(huán)伸入管內(nèi)至瓊脂斜面的低部，由底向上，將接種環(huán)輕貼斜面的表面曲折移動，使細菌劃在斜面的表面上。
9.取出接種棒，在火焰旁將培養(yǎng)基管棉塞堵上，然后將接種過細菌的接種棒在火焰上燒灼滅菌。
10.菌種的培養(yǎng)與保存
11.大腸桿菌35~37℃培養(yǎng)48小時
金黃色葡萄球菌30~35℃培養(yǎng)48小時枯草芽孢桿菌30~35℃培養(yǎng)48小時白色念珠菌23~28℃培養(yǎng)7天黑曲霉23~28℃培養(yǎng)7天
12.將培養(yǎng)物管自培養(yǎng)箱取出后放人冰箱(2-8℃)保存，一般2個月轉(zhuǎn)種一次。4.5菌液的制備
13.取上述培養(yǎng)好的菌種斜面移入接種室或凈化工作臺，放置室溫后,用接種環(huán)取菌苔少許接種置營養(yǎng)肉湯中(10ml/支,已滅菌),將已接種畢的細菌管置35℃~37℃培養(yǎng)18~24小時，取出備用。一般于冰箱中保存可用兩周。
14.取上述培養(yǎng)好的營養(yǎng)肉湯菌懸液(濃菌液)1ml，加到9ml0.9%無菌氯化鈉溶液混勻，為10-1，再取另一只刻度吸管吸取10-1菌液1ml加到9ml0.9%無菌氯化鈉溶液混勻，為10-2……以此類推，稀釋至含活菌數(shù)在50~100個。用平板計數(shù)。
15.此稀釋菌液用于試驗后加陽性對照，可在一周內(nèi)使用。
16.傳代和接種使用后，應做好《菌種傳代接種記錄》。
4.7.2菌懸液制備后，應做好《菌液制備使用記錄》
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