馬鏈球菌獸疫亞種的醫(yī)用價值及注意事項！
小楊 / 2019-12-26 09:22:18
馬鏈球菌獸疫亞種（S.equi subsp. zooepidimicus） 舊稱獸疫鏈球菌，常存在于皮膚、呼吸道、扁桃體及生殖道，可致各種家畜的炎癥和敗血癥。其中以馬最易感，引起子宮炎、流產(chǎn)或不孕癥、牛的乳腺炎，對羊和豬及禽類可引起敗血性鏈球菌病。自然康復(fù)后可形成免疫力，國內(nèi)研制的鏈球菌弱毒苗有一定的免疫效果。
一、基本信息
平臺編號：bio-53098
規(guī)格：0
拉丁屬名：Streptococcus equi subsp. zooepidemicus
中文名： 馬鏈球菌獸疫亞種
外文名： S.equi subsp. zooepidimicus
舊 稱： 獸疫鏈球菌
常存在于： 皮膚、呼吸道、扁桃體及生殖道等
分子量： 8.02×10—4.01×10
屬于類型： 蘭氏分群的C群β溶血鏈球菌
其它編號：ATCC39920
培養(yǎng)基編號：116
培養(yǎng)溫度：37
用途：生產(chǎn)超高分子量透明質(zhì)酸
保藏條件：斜面菌種和凍干菌種應(yīng)在 2-8°C 保存。
說明書下載：bio-53098
二、醫(yī)用價值
馬鏈球菌獸疫亞種（Streptococcus equi ssp. zooepidemicus, SEZ）屬于蘭氏分群的C群β溶血鏈球菌，能夠感染多種動物及人類。在我國，該菌是豬鏈球菌病的主要病原，能引起豬的腦膜炎、敗血癥、關(guān)節(jié)炎、心內(nèi)膜炎及突發(fā)性死亡，并對相關(guān)從業(yè)人員的健康構(gòu)成潛在威脅。盡管目前國內(nèi)市場上已有多種預(yù)防C群鏈球菌疫苗，但其免疫保護效果往往不能令人滿意，因此安全、高效的新型疫苗仍有待研究。本實驗室已采用免疫蛋白組學(xué)方法篩選馬鏈球菌獸疫亞種ATCC35246株細(xì)胞壁相關(guān)蛋白，并成功鑒定出10種免疫原性蛋白。多數(shù)蛋白在馬鏈球菌獸疫亞種上未曾見報道，其是否為保護性抗原仍需進一步鑒定。本文根據(jù)GenBank上已公布的這10種蛋白的基因序列，分析選擇免疫原性較好部分的基因序列設(shè)計并合成引物。以馬鏈球菌獸疫亞種ATCC35246株基因組DNA為模板，通過PCR技術(shù)，擴增出目的基因并定向克隆至表達載體pET-32a(+)、pET-28a(+)中，然后將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化至大腸桿菌BL21(DE3)。通過PCR鑒定和重組質(zhì)粒雙切鑒定后，挑取陽性克隆菌進行IPTG誘導(dǎo)表達。經(jīng)SDS-PAGE鑒定，目的蛋白均獲得良好的表達，大小與預(yù)期值一致。Western-blot顯示，融合蛋白均可被豬源ATCC35236株康復(fù)血清識別，表明其具有天然蛋白的部分抗原性。重組融合蛋白經(jīng)親和層析純化后，與等量ISA206佐劑進行乳化。通過皮下免疫途徑分組免疫ICR小鼠，并以ATCC35246全菌滅活苗和PBS作為對照組。用間接ELISA 法檢測小鼠血清IgG 抗體，并通過體外調(diào)理吞噬試驗測定抗血清的調(diào)理活性。結(jié)果表明重組蛋白免疫小鼠后能有效產(chǎn)生免疫應(yīng)答，血清中抗體水平有明顯升高，且有良好的補體依賴的調(diào)理吞噬功能。二免后以5LD50 ATCC35246 強毒株進行腹腔攻擊，結(jié)果顯示試驗組存活率優(yōu)于PBS對照組，其中免疫EF-G融合蛋白組小鼠的保護率達到50%，免疫TF、TK、GAPDH、PPH融合蛋白組均達到37.5%，表明原核表達產(chǎn)物免疫ICR小鼠，可使其對同源菌株攻擊產(chǎn)生一定的保護作用，在亞單位疫苗研制中具有應(yīng)用價值。
三、注意事項
1）凍干首次活化，干粉要全部用完，不能預(yù)留，用 0.1-0.2ml 的培養(yǎng)液或無菌水溶解，接種在 1-2 支平板上，因凍干粉處于休眠狀態(tài)，請勿接種多支斜面或平板，以避免因接種量不足而導(dǎo)致復(fù)蘇不成功；如有不明白之處，請務(wù)必先咨詢我單位技術(shù)人員，避免不必要的損失；
2）微生物菌種應(yīng)保藏于低溫、清潔干燥的地方，室溫放置時間過長會導(dǎo)致菌種衰退；
3）菌種操作應(yīng)在無菌條件下進行；轉(zhuǎn)種完畢，應(yīng)經(jīng)滅菌再做丟棄處理；
4）應(yīng)根據(jù)菌種狀況及時轉(zhuǎn)接，凍干菌種保藏時間通常為 2-25 年；
5）菌種使用過程中如出現(xiàn)雜菌污染或菌種生產(chǎn)性能下降，應(yīng)及時和中國微生物菌種查詢網(wǎng)聯(lián)系。