⒈繼代培養(yǎng)
在初代培養(yǎng)的基礎(chǔ)上所獲得的芽、苗、胚狀體和原球莖等,數(shù)量都還不多，它們需要進(jìn)一步增殖，使之越來(lái)越多，從而發(fā)揮快速繁殖的優(yōu)勢(shì)。
繼代培養(yǎng)是繼初代培養(yǎng)之后的連續(xù)數(shù)代的擴(kuò)繁培養(yǎng)過(guò)程。旨在繁殖出相當(dāng)數(shù)量的無(wú)根苗，最后能達(dá)到邊繁邊生根的目的。繼代培養(yǎng)的后代是按幾何級(jí)數(shù)增加的過(guò)程。如果以2株苗為基礎(chǔ)，那么經(jīng)10代將生成210株苗。
繼代培養(yǎng)中擴(kuò)繁的方法包括：切割莖段、分離芽叢、分離胚狀體、分離原球莖等。切割莖段常用于有伸長(zhǎng)的莖梢、莖節(jié)較明顯的培養(yǎng)物。這種方法簡(jiǎn)便易行，能保持母種特性。培養(yǎng)基常是MS0基本培養(yǎng)基；分離芽叢適于由愈傷組織生出的芽叢。培養(yǎng)基常是分化培養(yǎng)基。若芽叢的芽較小?？上惹谐裳繀残K，放入MS0培養(yǎng)基中，待到稍大時(shí)，再分離開(kāi)來(lái)繼續(xù)培養(yǎng)。
增殖使用的培養(yǎng)基對(duì)于一種植物來(lái)說(shuō)每次幾乎完全相同，由于培養(yǎng)物在接近最良好的環(huán)境條件，營(yíng)養(yǎng)供應(yīng)和激素調(diào)控下，排除了其它生物的競(jìng)爭(zhēng)，所以能夠按幾何級(jí)數(shù)增殖。
在快速繁殖中初代培養(yǎng)只是一個(gè)必經(jīng)的過(guò)程，而繼代培養(yǎng)則是經(jīng)常性不停的進(jìn)行過(guò)程。但在達(dá)到相當(dāng)?shù)臄?shù)量之后，則應(yīng)考慮使其中一部分轉(zhuǎn)入生根階段。從某種意義上講，增殖只是貯備母株，而生根才是增殖材料的分流，生產(chǎn)出成品。
⒉繼代培養(yǎng)時(shí)材料的玻璃化
實(shí)踐表明，當(dāng)植物材料不斷地進(jìn)行離體繁殖時(shí)，有些培養(yǎng)物的嫩莖、葉片往往會(huì)呈半透明狀，呈水跡狀，這種現(xiàn)象通常稱(chēng)為玻璃化。它的出現(xiàn)會(huì)使試管苗生長(zhǎng)緩慢、繁殖系數(shù)有所下降。玻璃化為試管苗的生理失調(diào)癥。
出現(xiàn)玻璃化的嫩莖不宜誘導(dǎo)生根，因此使繁殖系數(shù)大為降低。在不同的種類(lèi)、品種間，試管苗的玻璃化程度也有所差異，當(dāng)培養(yǎng)基上細(xì)胞分裂素水平較高時(shí)，容易出現(xiàn)玻璃化現(xiàn)象。在培養(yǎng)基中添加少量聚乙烯醇、脫落酸等物質(zhì)，能夠在一定程度上減輕玻璃化的現(xiàn)象發(fā)生。
呈現(xiàn)玻璃化的試管苗，其莖、葉表面無(wú)蠟質(zhì)，體內(nèi)的極性化合物水平較高，細(xì)胞持水力差，植株蒸騰作用強(qiáng)，無(wú)法進(jìn)行正常移栽。這種情況主要是由于培養(yǎng)容器中空氣濕度過(guò)高，透氣性較差造成的，其具體解決的方法為：
（1）增加培養(yǎng)基中的溶質(zhì)水平，以降低培養(yǎng)基的水勢(shì)；
（2）減少培養(yǎng)基中含氮化合物的用量；
（3）增加光照；
（4）增加容器通風(fēng)，最好進(jìn)行CO2施肥，這對(duì)減輕試管苗玻璃化的現(xiàn)象有明顯的作用；
（5）降低培養(yǎng)溫度，進(jìn)行變溫培養(yǎng)，有助于減輕試管苗玻璃化的現(xiàn)象發(fā)生；
（6）降低培養(yǎng)基中細(xì)胞分裂素含量，可以考慮加入適量脫落酸。
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