小鼠海馬神經元細胞的注意事項！
小楊 / 2019-12-21 08:34:22
一、背景及概述
海馬椎體神經元是海馬區(qū)的主要成分，主要功能是參與近期記憶、情緒及內臟功能調節(jié)、是老年性癡呆、癲癇等疾病的主要病灶之一。小鼠海馬神經元細胞培養(yǎng)是研究神經細胞生物學特性和外源干擾因素作用(細胞因子)的有效細胞模型，其在神經生物學，發(fā)育生物學體外實驗研究中已被廣泛應用。
二、傳代培養(yǎng)
傳代前準備--胰蛋白酶消化--吹打分散細胞--分裝稀釋細胞--繼續(xù)培養(yǎng)
1)將培養(yǎng)瓶內舊的培養(yǎng)液棄掉，然后用D-Hanks液洗兩次，(一定要洗干凈，以免影響胰酶的消化作用)。
2)加入0.25%胰酶-EDTA消化，25cm培養(yǎng)瓶加0.4ml，37度消化5min，鏡下看到細胞變圓，間隙增大。
3)立即加含10%FCS的培養(yǎng)液終止消化，用細胞刮刀輕刮，注意，這時候用吸管吹不下來，但是刮刀卻很容易刮下來，而且對細胞的損傷極小。
4)離心，棄上清，加新的培養(yǎng)液(10%FCS)，小心吹勻，分裝入新的培養(yǎng)瓶。
三、注意事項
1、不要輕易改變培養(yǎng)液，我曾經把MEM換成1640后，細胞傳幾代后莫名其妙死亡。
2、如果想節(jié)省消化液，上面第2步可換成3-5mlDPBS洗，主要是去除培養(yǎng)瓶里會影響消化液作用的成分。
3、自配消化液一定要調PH（=7.8-8）值，并且注意分裝，-20度保存，避免反復凍融，用前37度預熱，消化較好較快。
4、嚴格的無菌操作。
5、適度消化：消化的時間受消化液的種類、配制時間、加入培養(yǎng)瓶中的量等諸多因素的影響，消化過程中應該注意培養(yǎng)細胞形態(tài)的變化，一旦胞質回縮，連接變松散，或有成片浮起的跡象就要立即終止消化。
四、相關研究
有研究觀察枸杞多糖對HT22細胞缺糖缺氧再灌注損傷的影響。方法：構建HT22細胞缺糖缺氧再灌注損傷模型，設正常組、模型組、枸杞多糖100，50和25mg·L-1組，檢測細胞存活率；并通過HE染色觀察形態(tài)學改變；檢測細胞內SOD，GSH-PX，MDA，T-AOC；利用流式細胞術檢測線粒體膜電位。結果：枸杞多糖100和50mg·L-1組能明顯提高細胞存活率，顯著改善缺氧缺糖再灌注損傷引起的形態(tài)改變；可顯著提高細胞內SOD，GSH-PX及T-AOC，減少MDA的產生；改善線粒體膜電位下降。結論：枸杞多糖能夠顯著減輕缺糖缺氧再灌注損傷引起的HT22細胞過氧化損傷。
此外，有研究探索十溴聯(lián)苯醚(PBDE-209)誘導小鼠海馬神經元細胞凋亡的潛在機制。方法原代海馬神經元細胞和海馬神經元細胞系HT-22用0、6.25、12.5、25、50和100μg/mLPBDE-209處理24h。檢測原代海馬神經元細胞SOD活性，MDA、NO和GSH的含量，用AnnexinV/PI雙染法檢測海馬神經元細胞系HT-22細胞凋亡情況，用免疫蛋白印跡Westernblot檢測Bax、Bcl-2、CHOP、GRP78、PERK和Caspase-12蛋白表達水平。結果染毒組原代海馬神經元細胞和HT-22細胞系細胞存活率顯著降低(P<0.05)。原代海馬神經元細胞MDA、NO含量顯著升高(P<0.05)，GSH含量、SOD活性顯著降低(P<0.05)；原代海馬神經元細胞的Bax/Bcl-2比值、CHOP、Caspase-12蛋白表達水平升高(P<0.05)。HT-22細胞系GRP78、PERK、Caspase-12表達水平和細胞凋亡率升高(P<0.05)。結論氧化應激和內質網(wǎng)應激可能參與PBDE-209誘導的海馬神經元細胞凋亡過程。
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