玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基的質(zhì)量研究！
小楊 / 2019-12-18 09:17:47
一、概述
玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基是一種選擇性分離培養(yǎng)基，在pH酸性條件下使用，選擇性抑制細(xì)菌生長(zhǎng)，促進(jìn)真菌的生長(zhǎng)。玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基可用于霉菌和酵母菌計(jì)數(shù)。蛋白胨提供碳源和氮源；葡萄糖提供能源；磷酸二氫鉀為緩沖劑；硫酸鎂提供必須的微量元素；玫瑰紅鈉作為選擇性抑菌劑可抑制細(xì)菌的生長(zhǎng)，并可減緩某些霉菌因生長(zhǎng)過(guò)快而導(dǎo)致菌落漫延生長(zhǎng)。
二、成分(g/L)
蛋白胨5.0
磷酸二氫鉀1.0
玫瑰紅鈉0.0133
硫酸鎂0.5
葡萄糖10.0
瓊脂14.0
pH值6.0±0.225℃
三、用法
稱(chēng)取本品31.5g,加熱溶解于1000ml蒸餾水中,121℃高壓滅菌15分鐘備用。
四、質(zhì)量控制
在25－28℃培養(yǎng)48-96小時(shí)。
五、微生物靈敏度試驗(yàn)
按標(biāo)簽用法制備培養(yǎng)基，接種以下質(zhì)控菌株，放置20-25℃需氧培養(yǎng)48-72小時(shí)。注：回收率計(jì)算時(shí)，用SDA瓊脂做對(duì)照培養(yǎng)基。
六、質(zhì)量研究
謝文等人研究了中國(guó)藥品檢驗(yàn)用玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基整體質(zhì)量水平,為《中國(guó)藥典》等藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的修訂提供技術(shù)支持。方法:使用4個(gè)質(zhì)控菌對(duì)國(guó)內(nèi)外7家培養(yǎng)基生產(chǎn)商的玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基進(jìn)行質(zhì)量評(píng)價(jià)。待評(píng)價(jià)的玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基為5家中國(guó)培養(yǎng)基生產(chǎn)商和2家國(guó)外培養(yǎng)基生產(chǎn)商的市售商品，隨機(jī)編號(hào)為A、B、C、D、E、F、G，其中F和G為國(guó)外公司產(chǎn)品。玫瑰紅鈉瓊脂對(duì)照培養(yǎng)基(批號(hào)135005-201103)來(lái)自中國(guó)食品藥品檢定研究院。沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基(批號(hào)1131295)購(gòu)自O(shè)XOID(英國(guó))公司。0．9%氯化鈉注射液(批號(hào)130220403)購(gòu)自石家莊四藥有限公司。
結(jié)果:不同培養(yǎng)基的pH存在差異。7個(gè)生產(chǎn)商的培養(yǎng)基對(duì)白色念珠菌和黑曲霉的生長(zhǎng)率均大于0.7,生長(zhǎng)率均值差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。7個(gè)培養(yǎng)基和對(duì)照培養(yǎng)基對(duì)金黃色葡萄球菌的選擇因子均大于6;8個(gè)培養(yǎng)基產(chǎn)品對(duì)大腸埃希菌的選擇因子表現(xiàn)出差別,A、B、C、E、G和對(duì)照培養(yǎng)基無(wú)抑制性(選擇性);D和F表現(xiàn)出一定選擇性。結(jié)論:不同廠(chǎng)家的藥品檢驗(yàn)用玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基的促生長(zhǎng)能力表現(xiàn)一致;不同廠(chǎng)家產(chǎn)品的pH和對(duì)大腸埃希菌的選擇性存在差異。
中國(guó)藥品標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)對(duì)計(jì)數(shù)用玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基的pH和選擇性做出具體規(guī)定?！吨袊?guó)藥典》玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基沒(méi)有規(guī)定使用的pH，受試的7個(gè)培養(yǎng)基產(chǎn)品中有3個(gè)產(chǎn)品在包裝標(biāo)簽上注明使用時(shí)的pH范圍，1個(gè)中國(guó)產(chǎn)培養(yǎng)基注明pH范圍6．0±0．2，兩進(jìn)口產(chǎn)品分別注明pH范圍:6．0±0．2，7．2±0．2。本研究結(jié)果顯示5個(gè)中國(guó)產(chǎn)培養(yǎng)基pH呈現(xiàn)出較大差異。
研究表明，pH會(huì)影響真菌的菌絲體生長(zhǎng)和孢子的形成，玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基在pH酸性條件下使用，選擇性抑制細(xì)菌生長(zhǎng)，促進(jìn)真菌的生長(zhǎng)。也有學(xué)者研究得出，使用抗菌藥的中性pH培養(yǎng)基比酸性pH條件有利于真菌生長(zhǎng)，酸性條件下會(huì)導(dǎo)致培養(yǎng)后期會(huì)抑制真菌的生長(zhǎng)，或未能抑制細(xì)菌的生長(zhǎng)，會(huì)限制霉菌菌落的大小。所以，不同pH的培養(yǎng)基會(huì)影響檢測(cè)結(jié)果的穩(wěn)定性、可比性，《中國(guó)藥典》應(yīng)對(duì)玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基使用pH范圍做出明確規(guī)定，培養(yǎng)基生產(chǎn)商應(yīng)注明其產(chǎn)品的pH，讓使用者了解培養(yǎng)基性能并根據(jù)其使用目的做出選擇。
《中國(guó)藥典》中玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基用于霉菌及酵母菌的計(jì)數(shù)，配方中的玫瑰紅是一種指示劑，也是具有一定抑菌作用的選擇性成分，能抑制細(xì)菌的生長(zhǎng)和限制快速生長(zhǎng)霉菌菌落的大小和高度。玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基在pH酸性條件下使用，也會(huì)抑制細(xì)菌生長(zhǎng)。由于配方中不加抗菌藥，該培養(yǎng)基對(duì)細(xì)菌的抑制不徹底，在特殊情況下也會(huì)以該培養(yǎng)基上的細(xì)菌數(shù)作為細(xì)菌計(jì)數(shù)結(jié)果，所以，培養(yǎng)基選擇性的強(qiáng)與弱會(huì)對(duì)檢驗(yàn)結(jié)果產(chǎn)生不同影響，藥品檢驗(yàn)者在進(jìn)行培養(yǎng)基適用性檢查時(shí)也要測(cè)定其選擇性是否與對(duì)照培養(yǎng)基一致。配方中不加抗菌藥素的玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基的選擇性可能存在不足。在《中國(guó)藥典》以外的培養(yǎng)基標(biāo)準(zhǔn)中，玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基一般都添加抗菌藥，是一種選擇性強(qiáng)的霉菌及酵母菌計(jì)數(shù)培養(yǎng)基，《中國(guó)藥典》微生物限度檢查中該培養(yǎng)基也會(huì)用于細(xì)菌計(jì)數(shù)，配方中不添加抗菌藥，這可能會(huì)導(dǎo)致該培養(yǎng)基對(duì)細(xì)菌生長(zhǎng)的抑制能力不足，本研究結(jié)果也證明這一點(diǎn)。
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