人肝癌組織源細(xì)胞提取物的背景及應(yīng)用！
小楊 / 2019-12-04 08:52:26
一、背景
人肝癌組織源細(xì)胞提取物是從人原代肝癌組織源細(xì)胞細(xì)胞提取的，人原代肝癌組織源細(xì)胞細(xì)胞從人肝癌組織組織制備。人肝癌組織源細(xì)胞提取物可以直接用于基因克隆，表達(dá)圖譜分析以及各種分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)的研究。
人類肝細(xì)胞癌（HCC）細(xì)胞系因其親本和患者不同而具有不同的名稱。因此，根據(jù)不同來(lái)源命名的細(xì)胞系稱為人肝癌細(xì)胞系。方法取臨床肝癌患者術(shù)后肝癌組織,用酶消化法分離肝癌細(xì)胞,將其接種于無(wú)血清培養(yǎng)基中培養(yǎng),并在超低粘附24孔板中觀察肝癌干細(xì)胞克隆球生長(zhǎng)情況;用MTT比色法檢測(cè)肝癌干細(xì)胞克隆球增殖能力;采用流式細(xì)胞儀鑒定并分選CD90+細(xì)胞、CD90-細(xì)胞,CD133+細(xì)胞、CD133-細(xì)胞,將4種不同細(xì)胞組成CD90+細(xì)胞CD133+細(xì)胞、CD90-細(xì)胞CD133+細(xì)胞、CD90+細(xì)胞CD133-細(xì)胞及CD90-細(xì)胞CD133-細(xì)胞,分別接種于裸鼠右側(cè)腋窩皮下觀察其成瘤能力并記錄腫瘤體積;將裸鼠腫瘤組織HE染色觀察。
二、應(yīng)用
可用于HCV E2與CD81結(jié)合對(duì)Raji細(xì)胞調(diào)節(jié)及干擾素α對(duì)人肝癌細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑的影響研究：
丙型肝炎病毒(Hepatitis C virus,HCV)是有包膜的單股正鏈RNA病毒,屬于黃病毒科。HCV基因組長(zhǎng)約9.6 kb,有一個(gè)開放閱讀框架,編碼的多聚蛋白前體在病毒和宿主蛋白酶的作用下形成結(jié)構(gòu)蛋白(核心蛋白C以及糖基化的包膜蛋白E1、E2)和非結(jié)構(gòu)蛋白(p7、NS2、NS3、NS4A、NS4B、NS5A和NS5B)。
丙型肝炎病毒E2蛋白結(jié)合CD81分子對(duì)Raji細(xì)胞激活的調(diào)節(jié)人CD81分子是HCV的細(xì)胞表面受體,可結(jié)合HCV E2蛋白。事實(shí)上HCV假病毒顆粒(HCVpp),細(xì)胞培養(yǎng)的HCV(HCVcc)和所有血漿來(lái)源的HCV的感染性均源自與宿主表面CD81等受體分子的結(jié)合。CD81分子為四次跨膜素家族成員,有兩個(gè)胞外環(huán),分布于包括B、T淋巴細(xì)胞、NK細(xì)胞、肝細(xì)胞在內(nèi)的多種細(xì)胞表面,與細(xì)胞的活化、增殖、粘附等生物學(xué)功能密切相關(guān),尤其對(duì)于特異性免疫應(yīng)答的誘導(dǎo)具有重要作用。
在B細(xì)胞表面,由CD19-CD21-CD81(TAPA-1)-CD225(Leu-13)共同構(gòu)成Ⅱ型補(bǔ)體受體復(fù)合物,該復(fù)合物與B細(xì)胞受體(BCR)共同參與B細(xì)胞活化的信號(hào)傳導(dǎo)。B細(xì)胞的激活需要BCR以及CD19-CD21-CD81-CD225復(fù)合物與抗原的雙重結(jié)合信號(hào),其中,BCR與抗原分子中的抗原決定簇結(jié)合,而CD19-CD21-CD81-CD225復(fù)合物則通過(guò)CD21與補(bǔ)體C3裂解片段C3d結(jié)合(抗原與C3d結(jié)合)。
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