SKOV3/DDP 百歐博偉細(xì)胞系
小楊 / 2019-11-29 08:53:23
一、細(xì)胞簡(jiǎn)介
細(xì)胞活力：95％（Viability by Trypan Blue Exclusion）
細(xì)胞檢測(cè)：細(xì)胞不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌
培養(yǎng)條件：RPMI-1640(Hyclone)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%； 溫度：37℃。
傳代方法：建議1:2-1:3 兩天換液一次
凍存條件：完全培養(yǎng)基50%+40%FBS+10%DMSO
二、使用方法
客戶收到細(xì)胞后，請(qǐng)按照以下方法進(jìn)行操作。
1.收到細(xì)胞，請(qǐng)查看瓶子是否有破裂，培養(yǎng)基是否漏出，是否渾濁，如有請(qǐng)盡快和我們聯(lián)系。
2.如包裝完好，取出25cm2培養(yǎng)瓶，75%酒精消毒,拆下封口膜,在顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)是否正常，細(xì)胞的貼壁情況以及細(xì)胞密度,然后放入37℃，5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置2-3小時(shí)，以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
3.細(xì)胞狀態(tài)穩(wěn)定后，棄除培養(yǎng)瓶中大部分液體，只剩5-10ml左右培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)就可以了，超過80%匯合度時(shí)，請(qǐng)按細(xì)胞培養(yǎng)條件傳代培養(yǎng)。
4.細(xì)胞傳代
1)吸出25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,用PBS 2-3ml清洗細(xì)胞一次；
2)添加0.25%胰蛋白酶消化液約1.5ml至培養(yǎng)瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細(xì)胞回縮變圓后吸棄消化液，再加入完全培養(yǎng)液終止消化；
3)用吸管輕輕吹打混勻，按1:2等適當(dāng)?shù)谋壤M(jìn)行接種傳代，然后補(bǔ)充新鮮的完全培養(yǎng)基至5ml，放入37℃，5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
4)待細(xì)胞完全貼壁后，培養(yǎng)觀察。之后每隔2-3天更換新鮮的完全培養(yǎng)基。
三、注意事項(xiàng)
1.在細(xì)胞培養(yǎng)過程中，請(qǐng)注意保持無菌操作；
2.傳代培養(yǎng)過程中，胰酶消化時(shí)間不宜過長(zhǎng)，否則會(huì)影響細(xì)胞貼壁及其生長(zhǎng)狀態(tài)；
3.該細(xì)胞只可用于科研。
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