E.coli BL21(DE3)百歐博偉質控菌株
小楊 / 2019-11-19 08:47:45
基本信息
平臺編號：bio-82078
規(guī)格：冰袋泡沫盒快遞
拉丁屬名：E.coli BL21(DE3)
中文名：大腸桿菌BL21(DE3)菌種
貨期：款到1-3天出庫
運輸：冰袋泡沫盒快遞
培養(yǎng)方式：LB,37℃
保存：1ml，甘油管，-80℃
一、產品介紹
該菌株來源于 B 系大腸桿菌而不是 K-12，但有數個基因從 E.coli K-12轉導而來，它是廣泛使用的蛋白表達用宿主菌。
該菌株具有下列特點：
⒈染色體上攜帶由 lacUV5 啟動子控制的 T7 RNA 聚合酶基因，故在 IPTG誘導下，可以高效表達 T7 啟動子驅動的外源基因。
⒉缺失 lon 和 ompT 兩個蛋白酶基因，有利于外源蛋白的純化。
⒊由于有背景表達，故該菌株適合用于非毒性蛋白的表達，不適用于毒性蛋白的表達。
⒋本菌種不帶任何抗菌素抗性。
二、運輸及保存：低溫運輸，-80℃保存，有效期一年。
三、自備試劑：YPD 培養(yǎng)基、山梨醇、超純水等
四、使用方法
質粒轉化大腸桿菌BL21(DE3)菌種的方法有很多，如電轉化、化學轉化等。
根據實驗方法的不同，用的試劑和培養(yǎng)基有所不同。本手冊提供一個電轉化方
法。
⒈挑取酵母單菌落，接種至含有 5 mL YPD 培養(yǎng)基的 50 mL 三角瓶中，30℃，250-300 r/min 培養(yǎng)過夜；
⒉取 100-500 μL （≤1:100）的培養(yǎng)物接種至含有 50 mL 新鮮培養(yǎng)基的200 mL 三角搖瓶中，28~30℃，250-300 r/min 培養(yǎng)過夜(約 20 小時)，至 OD600 達到1.3~1.5；
⒊將細胞培養(yǎng)物于 4℃，1500g 離心 5 分鐘，用 50 mL 的冰預冷的無菌水將菌體沉淀重懸；
⒋按步驟 3 離心，用 25 mL 的冰預冷的無菌水將菌體沉淀重懸；
⒌按步驟 3 離心，用 2-5 mL，1M 的冰預冷的山梨醇溶液將菌體沉淀重懸；
⒍按步驟 3 離心，用 160 μL 的冰預冷的 1M 的山梨醇溶液將菌體沉淀重懸，其終體積約為 240 uL；
⒎將 5~20 μg 的線性化 DNA 溶解在 5~10 μL TE 溶液中，與 80 μL 的上述步驟 6 所得的菌體混勻，轉至 0.2 cm 冰預冷的電轉化杯中；
⒏將電轉化杯冰浴 5 分鐘；
⒐根據電轉化儀提供的資料，參考其他文獻及多次摸索，確定合適的電壓、電流、電容等參數，按優(yōu)化的參數，進行電擊（推薦：電壓 1.5 kV ；電容 25 μF ；電阻 200 Ω；電擊時間為 4 ～10 msec）。
⒑電擊完畢后，馬上加入 1 mL 1M 的冰預冷的山梨醇溶液將菌體混勻，轉至 1.5 mL 的 EP 管中，置于 30℃搖床低速培養(yǎng) 1 小時；
⒒將菌體懸液涂布于 MD 平板上，每 200~600 μL 涂布一塊平板；
⒓將平板置于 30℃倒置培養(yǎng)，直至單個菌落出現（3-4 天）。
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