畢赤酵母SMD1168H美國ATCC質(zhì)控微生物
小楊 / 2019-10-19 09:04:22
基本信息
平臺(tái)編號(hào)：bio-82061
規(guī)格：冰袋泡沫盒快遞
拉丁屬名：0
中文名：畢赤酵母SMD1168H
英文名：Pichia pastoris Strain SMD1168H
貨期：款到1-3天出庫
運(yùn)輸：冰袋泡沫盒快遞
培養(yǎng)方式：YPD,30℃
保存：1ML，甘油管，-80℃
簡(jiǎn)單介紹
畢赤酵母SMD1168H菌種生物緩沖物質(zhì)的質(zhì)量要求嚴(yán)格，如pKa值約在6~8之間；在有機(jī)溶劑中要有極小的溶解性；畢赤酵母SMD1168H菌種對(duì)生物膜要較無滲透性；受濃度、溫度，以及介質(zhì)中離子的影響要極小；能與陽離子形成可溶性絡(luò)合物；干燥或溶液狀態(tài)有極好的穩(wěn)定性等。
產(chǎn)品特點(diǎn)
⒈染色體上攜帶由lacUV5啟動(dòng)子控制的T7 RNA聚合酶基因，故在IPTG誘導(dǎo)下，可以高效表達(dá)T7啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)的外源基因。
⒉攜帶pLysS質(zhì)粒，該質(zhì)粒使菌株為氯霉素(34μg/mL)抗性，其lysS基因編碼的T7溶菌酶可以阻止T7 RNA聚合酶和其啟動(dòng)子的結(jié)合，阻斷背景表達(dá)，故本菌株主要用于毒性蛋白的表達(dá)。
⒊由于pLysS的復(fù)制起始位點(diǎn)為p15A型，跟復(fù)制起始位點(diǎn)為ColE1和pMB1型的質(zhì)粒兼容，故外源基因可以克隆到pUC系列或pBR322系列的質(zhì)粒中。
⒋缺失lon和ompT兩個(gè)蛋白酶基因，有利于外源蛋白的純化。
⒌EcoB系統(tǒng)Eco位點(diǎn)識(shí)別能力缺失，導(dǎo)致EcoB甲基化修飾和限制功能均失，甲基化和非甲基化質(zhì)粒均可轉(zhuǎn)入本菌種。
⒍本菌株具有氯霉素抗性。
產(chǎn)品描述
畢赤酵母SMD1168H菌種各種不同類型的細(xì)胞為了在即使進(jìn)行了好幾輪的分裂后也能保持其特征，每個(gè)細(xì)胞都必須“牢記”哪些基因在分裂前是激活的并將這些記憶傳遞給子細(xì)胞。細(xì)胞通過一種“書簽”過程來應(yīng)對(duì)這種挑戰(zhàn)。便利貼能在書本中標(biāo)出*后閱讀的頁碼，用同樣的方式，特定的分子在細(xì)胞中對(duì)激活的基因進(jìn)行標(biāo)記，從而在分裂后，相同的基因在新細(xì)胞中能立即重新激活。
“不過，我們之前所不知道的是，分裂前被標(biāo)記的基因是如何在分裂后重新激活的，”冷泉港實(shí)驗(yàn)室的David L. Spector教授說。通過觀察和測(cè)定一個(gè)細(xì)胞在分裂前其中的單個(gè)基因位點(diǎn)（基因特定的染色體位置）的激活動(dòng)力學(xué)，并與在新的子細(xì)胞中相同基因重新激活的動(dòng)力學(xué)進(jìn)行比較，Spector和他的團(tuán)隊(duì)現(xiàn)在得到了問題的答案。他們的研究結(jié)果發(fā)表在10月9號(hào)的《Nature Cell Biology 》上。
畢赤酵母SMD1168H菌種在細(xì)胞分裂或有絲分裂過程中，細(xì)胞重所有基因的活性出現(xiàn)暫時(shí)的中斷。細(xì)胞的染色質(zhì)——纏繞在組蛋白（折疊DNA的蛋白質(zhì)）上的染色體DNA——變得非常緊湊；大多數(shù)在通常情況下粘附在染色質(zhì)上以保持基因表達(dá)的蛋白質(zhì)被剝離開；轉(zhuǎn)錄——DNA拷貝成為RNA的過程——停止。當(dāng)分裂結(jié)束后，染色質(zhì)在新的細(xì)胞中重新壓縮或散開，轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)蛋白進(jìn)入到染色質(zhì)的特定位點(diǎn)，基因開始一輪的轉(zhuǎn)錄。
一、畢赤酵母SMD1168H菌種蛋白芯片技術(shù)的基本原理
蛋白芯片技術(shù)的基本原理是將各種蛋白質(zhì)有序地固定于滴定板、濾膜和載玻片等各種載體上成為檢測(cè)用的芯片，然后，用標(biāo)記了特定熒光抗菌素體的蛋白質(zhì)或其他成分與芯片作用，經(jīng)漂洗將未能與芯片上的蛋白質(zhì)互補(bǔ)結(jié)合的成分洗去，再利用熒光掃描儀或激光共聚焦掃描技術(shù)，測(cè)定芯片上各點(diǎn)的熒光強(qiáng)度，通過熒光強(qiáng)度分析蛋白質(zhì)與蛋白質(zhì)之間相互作用的關(guān)系，由此達(dá)到測(cè)定各種蛋白質(zhì)功能的目的。為了實(shí)現(xiàn)這個(gè)目的，首先必須通過一定的方法將蛋白質(zhì)固定于合適的體上，同時(shí)能夠維持蛋白質(zhì)天然構(gòu)象，也就是必須防止其變性以維持其原有特定的生物活性。另外，畢赤酵母SMD1168H菌種由于生物細(xì)胞中蛋白質(zhì)的多樣性和功能的復(fù)雜性，開發(fā)和建立具有多樣品并行處理能力、能夠進(jìn)行快速分析的高通量蛋白芯處技術(shù)將有利于簡(jiǎn)化和加快蛋白質(zhì)功能研究的進(jìn)展。
二、生成鹽復(fù)合物沉淀法
⒈金屬復(fù)合鹽法
許多有機(jī)物質(zhì)包括蛋白在內(nèi)，在堿性溶液中帶負(fù)電荷，能與金屬離子形成沉淀。根據(jù)有機(jī)物與它們之間的作用機(jī)制，可分為羧酸、胺及雜環(huán)等含氮化合物類，如銅鋅鎘；親羧酸疏含氮化合物類，如概鎂鉛；親硫氫基化合物類，如汞銀鉛。蛋白質(zhì)-金屬離子復(fù)合物的重要性質(zhì)是它們的溶解度對(duì)溶液的介電常數(shù)非常敏感，調(diào)整水溶液的介電常數(shù)（如加入有機(jī)溶劑），即可沉淀多種蛋白。
⒉有機(jī)鹽法
含氮有機(jī)酸如苦味酸、苦酮酸、鞣酸等能與有機(jī)分子的堿性功能團(tuán)形成復(fù)合物而沉淀析出。但此法常發(fā)生不可逆的沉淀反應(yīng)，故用于制備蛋白質(zhì)時(shí)，需采用較溫和的條件，有時(shí)還需加入一定的穩(wěn)定劑。
⒊無機(jī)復(fù)合鹽法
如磷鎢酸鹽、磷鉬酸鹽等。
畢赤酵母SMD1168H菌種以上鹽類復(fù)合物都具有很低的溶解度，極易沉淀析出。若沉淀為金屬復(fù)合鹽，可通以H2S使金屬變成硫化物而除去，若為有機(jī)酸鹽或磷鎢酸鹽，則加入無機(jī)酸并用乙醚萃取，把有機(jī)酸和磷鎢酸等移入乙醚中除去，或用離子交換法除去。值得注意的是此類方法常使蛋白質(zhì)發(fā)生不可逆沉淀，應(yīng)用時(shí)必須謹(jǐn)慎。
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