微生物查詢網(wǎng) 檢測TSAye平板上的典型菌落形態(tài)，用斜射光觀察是非常有幫助，但不是必須的。
從30℃或低于30℃培養(yǎng)的平板上挑取生長良好的典型菌落，涂于潔凈載玻片上，用0.85%生理鹽水制成懸浮液，壓上蓋玻片于相差顯微鏡的油鏡下觀察。李斯特氏菌為短桿狀，有輕微的旋轉(zhuǎn)和翻滾運動。而大的桿狀，或快速運動的桿狀細菌則不是李斯特氏菌。應用陽性的李斯特氏菌做對照。
過氧化氫酶試驗：李斯特氏菌陽性反應。
革蘭氏染色試驗：將培養(yǎng)16-24小時的培養(yǎng)物進行染色。李斯特氏菌呈短桿狀陽性菌。但若培養(yǎng)時間過長，染色會發(fā)生變化。細胞呈現(xiàn)Coccoidal菌現(xiàn)象。著色輕的部位呈現(xiàn)柵欄狀，被當作類白喉菌排除掉。
挑取典型菌落接種到TSBye培養(yǎng)基(進行糖發(fā)酵試驗)和其它檢測培養(yǎng)基上，35℃培養(yǎng)24小時，這些培養(yǎng)物可置于4℃冰箱中保存數(shù)天，以重復利用。商業(yè)化的試劑盒也可于分離鑒定(見E-11)。
溶血試驗：將7%羊血瓊脂平板底面劃分為20-25個小格，從TSAye上挑取菌落刺種到血平板上，每格刺種一個菌落，并刺種陽性對照菌(單增李斯特氏菌和綿羊李斯特氏菌)和陰性對照菌(英諾克李斯特氏菌)，于35℃培養(yǎng)24-48小時，穿刺時盡量接近底部，但不要觸到底面，同時避免瓊脂破裂。
于明亮處觀察潔凈的血瓊脂平板，單增李斯特氏菌和西爾李斯特氏菌在刺種點周圍產(chǎn)生狹小的透明溶血環(huán)，英諾克李斯特氏菌無溶血環(huán)，綿羊李斯特氏菌產(chǎn)生大的透明溶血環(huán)。注意：不要據(jù)此來區(qū)別李斯特氏各種菌，僅僅是一種溶血現(xiàn)象。用CAMP試驗來確證李斯特氏各種菌。(注意：當血平板的厚度比通常的5mm更薄時，非常容易觀察到溶血環(huán)，另外這可以通過覆蓋一層血瓊脂1-2mm來實現(xiàn))。
硝酸鹽還原試驗：這個試驗是非必需的。只有默氏李斯特氏菌能降解硝酸鹽，從而區(qū)別開格氏李斯特氏菌和默氏李斯特氏菌。用TSBye肉湯培養(yǎng)物接種到硝酸鹽肉湯中，35℃培養(yǎng)5天，加入0.2ml試劑A，再加入0.2ml試劑B，混勻，如出現(xiàn)紫紅色，則表明降解了硝酸鹽，存在亞硝酸鹽。如無顏色變化，則加入少量鋅粉，放置1小時，如出現(xiàn)紅色，表明仍有硝酸鹽存在，未被細菌降解。也可按以下過程進行檢測:加入0.2ml試劑A，再加入0.2ml試劑C，混勻，如出現(xiàn)桔紅色，則表明降解了硝酸鹽，存在亞硝酸鹽。如無顏色變化，則加入少量鋅粉，放置1小時，如出現(xiàn)桔紅色，表明仍有硝酸鹽存在，未被細菌降解。
動力試驗：由TSBye肉湯培養(yǎng)物接種到SIM培養(yǎng)基或MTM培養(yǎng)基， 室溫培養(yǎng)7天，逐日觀察，李斯特氏菌有動力，呈傘狀生長。MTM培養(yǎng)基上形狀尤為突出，可以明顯觀察到傘形。另外，通過相差顯微鏡，可以觀察30℃ TSBye培養(yǎng)基上的培養(yǎng)物的翻滾運動。
將TSBye上培養(yǎng)物接種于含以下0.5%糖的紫色肉湯中(可加入小倒管)：葡萄糖、七葉苷、麥芽糖、甘露醇、鼠李糖和木糖。35℃培養(yǎng)7天。陽性反應是產(chǎn)酸不產(chǎn)氣。不同菌種的生化反應見表1。所有李斯特氏菌對葡萄糖、七葉苷、麥芽糖都是陽性反應。除格氏李斯特氏菌和默氏李斯特氏菌外的李斯特氏菌對甘露醇呈陰性反應。若OXA、PALCAM、MOX或LPM(加七葉苷和三價鐵)的純化物著色是確定的，則七葉苷發(fā)酵實驗可省略。
CAMP試驗：當溶血試驗結(jié)果不確定時，可用CAMP實驗來區(qū)別李斯特氏菌的各個種。在羊血瓊脂平板上劃兩條平行線，兩條線上分別接種β型溶血金黃色葡萄球菌與馬紅球菌培養(yǎng)物。在該兩線之間，垂直劃線，接種待測培養(yǎng)物，與兩線相近但不相交，于35℃培養(yǎng)24-48小時后，觀察溶血情況。單增李斯特氏菌與西爾李斯特氏菌在靠近金黃色葡萄球菌接種點附近的溶血增強，其它李斯特氏菌不溶血。單增李斯特氏菌在24小時溶血現(xiàn)象比在48小時更明顯。為使馬紅球菌能長出一條很好的劃線，需要將斜面培養(yǎng)物培養(yǎng)48小時，而不是24小時。同時，羊血瓊脂平板需新鮮配制。
北京百歐博偉生物技術(shù)有限公司擁有對菌種、細胞、培養(yǎng)基、配套試劑等產(chǎn)品需求者的極優(yōu)質(zhì)服務，對購買項目的前期資料提供,中期合同保證,后期貨物跟蹤到最終售后的確保項目準確到位，都有相關(guān)人士進行維護,確保您在中國微生物菌種查詢網(wǎng)中獲得最優(yōu)質(zhì)服務！也正因為此，北京百歐博偉生物技術(shù)有限公司與國內(nèi)外多家研制單位、生物制藥、第三方檢測機構(gòu)和科研院所院校、化工企業(yè)有著良好、長期和穩(wěn)定的合作關(guān)系！