空腸彎曲菌檢驗(yàn)操作步驟！
小楊 / 2019-09-26 09:28:51
空腸彎曲菌檢驗(yàn)操作步驟
一、樣品處理
⒈一般樣品
取25g（mL)樣品（水果、蔬菜、水產(chǎn)品為50g）加入盛有225mL Bolton肉湯的有濾網(wǎng)的均質(zhì)袋中（若為無濾網(wǎng)均質(zhì)袋可使用無菌紗布過濾），用拍擊式均質(zhì)器均質(zhì)1min～2min，經(jīng)濾網(wǎng)或無菌紗布過濾，將濾過液進(jìn)行培養(yǎng)。
⒉整禽等樣品
用200mL0.1%的蛋白胨水中充分沖洗樣品的內(nèi)外部，并振蕩2min～3min，經(jīng)無菌紗布過濾至250mL離心管中，16000g離心15 min后棄去上清，用10 mL 0.1%蛋白胨水懸浮沉淀，吸取3 mL于100 mLBolton肉湯中進(jìn)行培養(yǎng)。
⒊貝類
取至少12個帶殼樣品，除去外殼后將所有內(nèi)容物放到均質(zhì)袋中，用拍擊式均質(zhì)器均質(zhì)1min～2min，取25g樣品至225 mLBolton肉湯中（1:10稀釋），充分震蕩后再轉(zhuǎn)移25mL于225 mLBolton肉湯中（1:100稀釋），將1:10和1:100稀釋的Bolton肉湯同時進(jìn)行培養(yǎng)。
⒋蛋黃液或蛋漿
取25 g（mL)樣品于125mLBolton肉湯中并混勻（1:6稀釋），再轉(zhuǎn)移25mL于100mLBolton肉湯中并混勻（1:30稀釋），同時將1:6和1:30稀釋的Bolton肉湯進(jìn)行培養(yǎng)。
⒌鮮乳、冰淇淋、奶酪等
若為液體乳制品取50g；若為固體乳制品取50g加入盛有50mL0.1%蛋白胨水的有濾網(wǎng)均質(zhì)袋中，用拍擊式均質(zhì)器均質(zhì)15s～30 s，保留過濾液。必要時調(diào)整pH值至7.5±0.2，將液體乳制品或?yàn)V過液以20000g 離心30 min后棄去上清，用10 mL Bolton肉湯懸浮沉淀（盡量避免帶入油層），再轉(zhuǎn)移至90 mLBolton肉湯進(jìn)行培養(yǎng)。
⒍需表面涂拭檢測的樣品
無菌棉簽擦拭檢測樣品的表面（面積至少100 cm2以上），將棉簽頭剪落到100 mLBolton肉湯中進(jìn)行培養(yǎng)。
⒎水樣
將4 L 的水（對于氯處理的水，在過濾前每升水中加入5 mL1mol/L硫代硫酸鈉溶液）經(jīng)0.45 μm濾膜過濾，把濾膜浸沒在100 mL Bolton肉湯中進(jìn)行培養(yǎng)。
二、預(yù)增菌與增菌
在微需氧條件下，36 ℃±1 ℃培養(yǎng)4 h，如條件允許配以100 r/min的速度進(jìn)行振蕩。必要時測定增菌液的pH值并調(diào)整至7.4±0.2，42 ℃±1 ℃繼續(xù)培養(yǎng)24 h～48 h。
三、分離
將24 h增菌液、48 h增菌液及對應(yīng)的1:50稀釋液分別劃線接種于Skirrow血瓊脂與mCCDA瓊脂平板上，微需氧條件下42 ℃±1 ℃培養(yǎng)24 h～48 h。另外可選擇使用空腸彎曲菌顯色平板作為補(bǔ)充。
觀察24 h培養(yǎng)與48 h培養(yǎng)的瓊脂平板上的菌落形態(tài)，mCCDA瓊脂平板上的可疑菌落通常為淡灰色，有金屬光澤、潮濕、扁平，呈擴(kuò)散生長的傾向。Skirrow血瓊脂平板上的第一型可疑菌落為灰色、扁平、濕潤有光澤，呈沿接種線向外擴(kuò)散的傾向；第二型可疑菌落常呈分散凸起的單個菌落，邊緣整齊、發(fā)亮。空腸彎曲菌顯色培養(yǎng)基上的可疑菌落按照說明進(jìn)行判定。
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