中國(guó)微生物菌種查詢網(wǎng) 所有微生物都受到其生存環(huán)境中pH的影響。通常,選擇性物質(zhì)的存在會(huì)縮小它們生長(zhǎng)的pH范圍。有時(shí)，培養(yǎng)基的酸度或堿度也能作為一種生長(zhǎng)選擇因子。而對(duì)于生化測(cè)試培養(yǎng)基，微生物在基質(zhì)中顯示活性的的范圍比生長(zhǎng)所需的pH范圍窄。因此，將培養(yǎng)基的pH調(diào)至預(yù)期的范圍內(nèi)是很重要的。當(dāng)實(shí)驗(yàn)室根據(jù)培養(yǎng)基成分自己配制培養(yǎng)基時(shí)，必須檢測(cè)并調(diào)整pH。必須指出的是，即使是生產(chǎn)廠商提供的現(xiàn)成的合成脫水培養(yǎng)基(尤其是對(duì)一些庫存的脫水培養(yǎng)基)，在制成實(shí)驗(yàn)用培養(yǎng)基后也需要對(duì)其最終pH進(jìn)行測(cè)定。
測(cè)定培養(yǎng)基pH的最準(zhǔn)確的方法是使用pH計(jì)，使用前必須用已知pH的（通常pH為4-7)標(biāo)準(zhǔn)緩沖溶液進(jìn)行校準(zhǔn)。將pH計(jì)的電極用蒸餾水沖洗后浸入到燒杯的培養(yǎng)基中，就可以從pH計(jì)的刻度讀出培養(yǎng)基的pH。每個(gè)生產(chǎn)廠商對(duì)每種不同pH計(jì)都提供有詳細(xì)的操作說明。
配制培養(yǎng)基時(shí)，使用帶機(jī)械攪拌的pH計(jì)可以很容易地調(diào)整pH。
培養(yǎng)基位在能夠不停攪拌的容器(如大燒杯）中配制，最好使用磁力攪拌器，磁力攪拌器帶有聚乙烯或聚四氟乙烯包裝的磁棒。含瓊脂的培養(yǎng)基需在融化后調(diào)整其pH，用可加熱的磁力攪拌器很容易辦到。調(diào)節(jié)pH時(shí)用已知pH的標(biāo)準(zhǔn)緩沖液溶液先對(duì)pH計(jì)進(jìn)行校準(zhǔn)。然后將復(fù)合電極和電阻溫度計(jì)(如果有)置于培養(yǎng)基，從燒杯遠(yuǎn)離電極的一端緩慢加人適量的鹽酸和氫氧化鈉，保到培養(yǎng)基達(dá)到并保持所需的pH。
pH計(jì)的溫度補(bǔ)償應(yīng)考慮到溫度對(duì)電極系統(tǒng)的影響：在一些稀釋液和培養(yǎng)基中，pH隨溫度的變化而有相當(dāng)大的變化。對(duì)于液體培養(yǎng)基和稀釋液而言，通常既可以在25℃下,也可以在其使用時(shí)的溫度下調(diào)整和測(cè)定。
瓊脂培養(yǎng)基必須在溶解后進(jìn)行pH的調(diào)整，溶解的溫度在45℃以上。因此，固體培養(yǎng)基應(yīng)在其使用溫度確定pH。這時(shí)應(yīng)使用平頭的復(fù)合電極，同時(shí)用手動(dòng)校準(zhǔn)pH計(jì)的溫度補(bǔ)償。在制備培養(yǎng)基時(shí),若測(cè)定出培養(yǎng)基在熔化狀態(tài)和凝固狀態(tài)的pH有所不同時(shí)，說明在調(diào)整pH產(chǎn)生誤差。
同樣，制備的培養(yǎng)基在加熱滅菌處理(如高壓滅菌〉時(shí)，也可能會(huì)產(chǎn)生pH的變化。對(duì)于脫水培養(yǎng)基，生產(chǎn)廠商己考慮到這一點(diǎn)，通常不謠要再調(diào)整其pH。但應(yīng)認(rèn)真核對(duì)待用培養(yǎng)基的pH。如果脫水的瓊脂培養(yǎng)基在再次溶解或制備的過程中必須調(diào)整pH，那么最好在滅菌操作步驟之后用過濾滅菌的鹽酸和氫氧化鈉溶液進(jìn)行調(diào)整，以避免造成因再次滅菌而形成的培養(yǎng)基的過度加熱。當(dāng)用不同的原枓或藥品制備培養(yǎng)基時(shí)，必須在高壓滅菌后檢測(cè)培養(yǎng)基的pH。此外，如果發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)基的在每次高壓滅菌后都發(fā)生相同變化，可在配制培養(yǎng)基時(shí)對(duì)pH進(jìn)行適當(dāng)調(diào)整。但仍需測(cè)定培養(yǎng)基滅菌后的最終pH。
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