目的：探索一種真菌染色新方法。方法：對(duì)傳統(tǒng)染色法與改良染色法進(jìn)行比較。
結(jié)果：傳統(tǒng)染色法鏡下所見(jiàn)，菌絲體與孢子分離，底影不干凈，影響觀察；改良染色法使真菌孢子不易脫落，菌絲和孢子能保持自然形態(tài)，染色干凈、清晰。
結(jié)論：本方法簡(jiǎn)單、易掌握，非常適用于實(shí)驗(yàn)室大批量制片。
真菌的種類很多，在自然界分布極廣，它的形態(tài)結(jié)構(gòu)復(fù)雜，菌絲體和孢子的形態(tài)特征隨真菌種類不同而異，是鑒別真菌的重要依據(jù)。傳統(tǒng)的真菌染色方法，常常造成真菌孢子脫落，從而改變了它原有的形態(tài)構(gòu)造，影響觀察、鑒定。我們經(jīng)多次反復(fù)摸索，利用真菌菌絲體呈上聳向空間生長(zhǎng)特征，用插片法使菌絲體生長(zhǎng)在蓋玻片上，這樣制作的真菌染色片效果更為理想，在以往的文獻(xiàn)中還未見(jiàn)報(bào)道?，F(xiàn)將本方法報(bào)道如下。
一、材料與方法
⒈菌種
青霉菌、黑曲菌、黃曲菌、毛霉菌、石膏樣小孢子菌、絮狀表皮癬菌等，以上菌種均為本實(shí)驗(yàn)室保存提供。
⒉染液的配制染液
苯酚(結(jié)晶品)20 g，乳酸20 ml，甘油40 ml，棉蘭(Cotton blue)0．05 g，蒸餾水20 ml，將苯酚、乳酸、甘油溶解于蒸餾水中(可微加熱)，再加入棉蘭，搖勻，備用。
⒊沙氏培養(yǎng)基的制備
蛋白胨10 g，葡萄糖40 g，瓊脂1 g，蒸餾水1 000 ml，68.95 kPa，20 min，備用。
⒋方法
⑴設(shè)試驗(yàn)組與對(duì)照組兩組，各染片100張。試驗(yàn)組即改良的真菌染色法，將沙氏培養(yǎng)基傾注大平板，取無(wú)菌蓋玻片沾上融化的沙氏培養(yǎng)基，密集豎立插在大平板上，將上述菌種用滅菌蒸餾水輕輕刮下，滴在大平板上，并輕輕搖動(dòng)，使之均勻分布于平板表面，蓋上平板蓋，于25 ℃～28 ℃濕盒孵育，72 h取出后，用鑷子輕輕取出蓋玻片，用火焰固定或自然晾干后，滴上棉蘭染色液，2 h~3 h后，于水中輕柔漂洗，然后晾干，放載玻片上封片。對(duì)照組即傳統(tǒng)的真菌染色法，在無(wú)菌載玻片上滴加融化的沙氏培養(yǎng)基1滴~2滴，將菌種接種在沙氏培養(yǎng)基上，加蓋無(wú)菌蓋玻片，于25 ℃～28 ℃濕盒孵育，72 h取出后，揭開(kāi)蓋玻片，滴加染液，使真菌培養(yǎng)物與棉蘭染液混合染色。
⑵染色效果評(píng)判標(biāo)準(zhǔn)
優(yōu)片：鏡下觀察可見(jiàn)真菌菌絲體和孢子形態(tài)保持自然完整，孢子基本沒(méi)有脫落，底影干凈、清晰；良片：在鏡下觀察可見(jiàn)大部分菌絲與孢子形態(tài)較為完整、有少許脫落、底影較臟；差片：在鏡下觀察可見(jiàn)孢子與菌絲分離、脫落、底影臟，形態(tài)不完整。
二、結(jié)果
試驗(yàn)組：染片100張屬優(yōu)片有80張，良片有10張，差片有10張；對(duì)照組：染片100張屬優(yōu)片有10張，良片有10張，差片有80張。兩組優(yōu)片率比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。
三、討論
兩種不同染色方法的結(jié)果比較，可以看出制片效果有以下明顯差異：傳統(tǒng)法由于菌種接種在載玻片瓊脂培養(yǎng)，棉蘭液染色時(shí)，染料掛有瓊脂，鏡下可見(jiàn)底影臟，影響檢測(cè)效果；改良法是直接滴加棉蘭染液在蓋玻片上進(jìn)行染色，這樣有效減少雜質(zhì)的干擾，提高底影潔凈度，鏡下可見(jiàn)干凈、清晰；傳統(tǒng)法掀開(kāi)蓋玻片，容易使孢子與菌絲分離、脫落；改良法是利用真菌菌絲體和孢子向上生長(zhǎng)構(gòu)造，菌絲體和孢子生長(zhǎng)在蓋玻片上，使真菌形態(tài)保持自然完整。我們經(jīng)多次反復(fù)實(shí)踐證明，本法簡(jiǎn)單、易掌握，效果好并適合大批量快速制片，不失為一種真菌染色的新方法。
歡迎訪問(wèn)中國(guó)微生物菌種查詢網(wǎng)，本站隸屬于北京百歐博偉生物技術(shù)有限公司，單位現(xiàn)提供微生物菌種及其細(xì)胞等相關(guān)產(chǎn)品查詢、咨詢、訂購(gòu)、售后服務(wù)！與國(guó)內(nèi)外多家研制單位，生物醫(yī)藥，第三方檢測(cè)機(jī)構(gòu)，科研院所有著良好穩(wěn)定的長(zhǎng)期合作關(guān)系！