一級菌種轉(zhuǎn)管的注意事項
①接種前要準備好一些無菌棉塞，一起放入無菌室內(nèi)，以便在所用棉塞受潮時更換。
②接種時切勿使試管口、瓶口或培養(yǎng)皿開縫處離開酒精燈火焰的無菌區(qū)。
③操作時試管口、瓶口一般不向上，以減少雜菌污染機會。
④接種時，操作人員盡量少走動，以減少空氣流動揚起的灰塵污染。
⑤接種時留下的污物，如用過的酒精棉、火柴梗等要及時清除，以免引起污染。
⑥如一次接種不同菌種時，要注意做好標記，以免搞混。
一級菌種的培養(yǎng)
(1)菌絲培養(yǎng) 斜面接種后，應(yīng)立即置于適溫下培養(yǎng)。當種塊上的菌絲萌發(fā)并向培養(yǎng)基上蔓延后，可將培養(yǎng)溫度降低2～3℃，菌絲生長速度雖然略微減慢，但生長更加健壯。氣生菌絲發(fā)達的菌種，如蘑菇的氣生型菌種，還要采取逐步降溫法進行培養(yǎng)。雙孢蘑菇接種后，將菌種置于20～22℃條件下培養(yǎng)7～8d后，當菌落長到蠶豆粒大時，將培養(yǎng)溫度下降到15℃左右；菌絲長到試管斜面1/2以上時，再移入12℃左右的溫度下培養(yǎng)，至長滿斜面。
(2)溫度適宜母種培養(yǎng)過程中，若溫度過高，則菌絲衰老快，易倒伏發(fā)黃。同時，還要防止溫度波動過大，在溫差過大的情況下，試管內(nèi)壁凝成水珠滴下，水滴接觸的菌絲便會倒伏、發(fā)黃。因此母種保溫培養(yǎng)時，保溫的熱源一定要均衡、穩(wěn)定。在自然氣溫較低時，為防止打開培養(yǎng)箱溫度急劇下降，試管內(nèi)壁出現(xiàn)冷凝水，可用紗布做成棉墊，將試管包在棉墊內(nèi)培養(yǎng)，或?qū)⒃嚬芊謩e裝入鋁質(zhì)飯盒內(nèi)，用棉墊蓋好，也可防止熱量過快散發(fā)。
(3)防止母種老化平菇、蘑菇（氣生型）母種培養(yǎng)過程中，在種塊附近往往會出現(xiàn)一個菌絲塌陷區(qū)，特別是蘑菇菌種，沿著塌陷區(qū)還會出現(xiàn)倒伏、發(fā)黃現(xiàn)象。其原因與移植時瓊脂塊過厚、培養(yǎng)溫度過高有關(guān)。在種塊過厚、溫度過高時，種塊上菌絲很快向四周蔓延生長，然后才能向培養(yǎng)基內(nèi)定置。其中部菌種老化快，不易做母種使用。
(4)注意通風母種培養(yǎng)期間，通風不良、氧氣不足，菌絲容易衰老、發(fā)黃。因此，大量的母種不易放在通風不良的恒溫箱內(nèi)培養(yǎng)，應(yīng)放在通風較好的恒溫室內(nèi)培養(yǎng)。如果沒有恒溫室，放在恒溫箱內(nèi)的菌種也不能過分擁擠。
(5)斜面放置接種后的斜面，在恒溫箱或恒溫室內(nèi)培養(yǎng)時，應(yīng)垂直放在柵板或菌種架上，以免培養(yǎng)過程中凝結(jié)的水汽溢流到斜面上。必須平放時，也應(yīng)該將管口前段稍微墊高，或?qū)⒃嚬芊旁趬|有棉墊的淺盤內(nèi)，并使斜面向下。培養(yǎng)皿培養(yǎng)期間，應(yīng)將皿底向上。
(6)防止雜菌污染在正常情況下，斜面接種后，即以種塊為生長中心向四周呈輻射狀蔓延。金針菇的菌絲前端可形成粉孢子，老熟的猴頭菌絲會斷裂，銀耳芽孢能產(chǎn)生擲孢子，因此在斜面上除菌塊萌發(fā)菌絲外，還會出現(xiàn)一些分散性的小菌落。其他菌種出現(xiàn)類似分散性小菌落，便要認真對待，如果是霉菌菌落，5～10d后便會形成色彩鮮明的分生孢子，應(yīng)予淘汰；若在種塊的一側(cè)或其周圍出現(xiàn)黏稠狀物，大都是由母種不純造成的細菌污染；斜面上出現(xiàn)分散性細菌菌落，則與滅菌不徹底或無菌操作不嚴有關(guān)。細菌菌落向四周擴散速度比食用菌菌絲生長速度要慢，很容易被生長中的菌絲覆蓋。因此，在接種后的前幾天要逐管檢查，防止摻人雜菌，確保母種純度。
靈芝、樹舌等菌種，表面氣生菌絲易革質(zhì)化，為延緩老化，最好用黑紙包裹試管培養(yǎng)。
在高溫梅雨季節(jié)，利用自然溫度培養(yǎng)母種，在通風不良的情況下，棉塞上很容易生長霉菌，應(yīng)采取以下防霉措施：用95%的乙醇95mL，加入甘油5mL，升汞0.5g，另加龍膽紫、美藍（亞甲藍）、中性紅少許做指示劑。取下棉塞，蘸取少量防霉劑，再塞到試管口內(nèi)，慎勿接觸培養(yǎng)物。也可在乙醇揮發(fā)后再接種，此法也有防螨作用。還有一種更簡單的方法是用玻璃紙或錫箔紙包裹試管或管口，并能防止水分蒸發(fā)。
(7) -級菌種的保藏一級菌種尚未全部長滿之前，就應(yīng)及時移入1～4℃溫度下保存。保存的母種要貼上標簽，或用特種鉛筆、油質(zhì)記號筆在試管上做好標記。
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