細(xì)胞培養(yǎng)基的種類不同，其使用上可能會(huì)有一定的差異，因此正確的配制細(xì)胞培養(yǎng)基是使其被充分利用的前提。
一，培養(yǎng)基配制準(zhǔn)備工作
物品準(zhǔn)備、器皿清潔（物理、化學(xué)及生物清潔）符合GMP要求，最終目的是保證細(xì)胞培養(yǎng)基的純度：避免混入抑制物、有毒物質(zhì)及減少微生物污染的機(jī)會(huì)。
配制前需要確保設(shè)備及儀器正常運(yùn)轉(zhuǎn)，通常所用的設(shè)備或儀器主要包括：
1) 超凈工作間或超凈工作臺(tái)：可根據(jù)自身?xiàng)l件或建立設(shè)施完備的萬(wàn)級(jí)、千級(jí)、百級(jí)等超凈工作環(huán)境。
2) 烤箱：烘烤玻璃器皿、去除熱原。
3) 高壓蒸汽滅菌鍋
4) 恒溫培養(yǎng)箱：用于檢測(cè)過(guò)濾后的細(xì)胞培養(yǎng)基中是否還含有細(xì)菌的檢測(cè)。
5) 過(guò)濾器：不銹鋼濾器或一次性膜過(guò)濾器。
6) 儀器：天平，pH 計(jì)，滲透壓儀，正壓、負(fù)壓蠕動(dòng)泵或吸引器，純水設(shè)備。
由于使用或配制量不同，在設(shè)備或儀器的規(guī)格上可能會(huì)有出入，但需確保所有的設(shè)備和儀器需按GMP等相關(guān)規(guī)定進(jìn)行驗(yàn)證，其中，配液用水管路出水口所出水每天需進(jìn)行檢測(cè)；不銹鋼過(guò)濾器每次使用前和使用后需進(jìn)行無(wú)菌驗(yàn)證，驗(yàn)證合格方可使用。
二，干粉細(xì)胞培養(yǎng)基的配制方式及注意事項(xiàng)
在細(xì)胞培養(yǎng)基配制過(guò)程中，不同的培養(yǎng)基其溶解性可能有一定的差別，培養(yǎng)基配制過(guò)程中血清、碳酸氫鈉及抗生素等的添加時(shí)間和用量、pH和滲透壓的測(cè)定及酸堿度是否需要調(diào)節(jié)等，都可能影響最終細(xì)胞培養(yǎng)基性能的發(fā)揮。
（1）配制常規(guī)過(guò)濾除菌粉末細(xì)胞培養(yǎng)基
1) 配制用水：通常選擇最新制備的超純水器過(guò)濾出的去熱原（細(xì)菌內(nèi)毒素<0.25EU/m）培養(yǎng)基用水（TOC< 10μg/L或者是10mg/L，電阻率：18.2MΩ（25℃））。最好現(xiàn)用現(xiàn)制備，隔夜儲(chǔ)存用水（非無(wú)菌）的細(xì)菌內(nèi)毒素及電導(dǎo)率等升高，影響細(xì)胞的增殖和產(chǎn)品的質(zhì)量；
2) 培養(yǎng)基粉劑的稱量：小量采用天平稱量，要求準(zhǔn)確；大量采用市售大包裝，配制時(shí)可以根據(jù)說(shuō)明；
3) 粉劑溶解：溶解充分，觀察有無(wú)顆粒，顏色改變情況等；
4) 過(guò)濾前約半個(gè)小時(shí)（根據(jù)配制量可調(diào)）按使用說(shuō)明添加NaHCO3，充分溶解；
5) 測(cè)定pH，根據(jù)需要用1mol / L 氫氧化鈉溶液或 1mol /L鹽酸溶液來(lái)調(diào)節(jié)pH。過(guò)濾后的pH將會(huì)有所增長(zhǎng)；
6) 定容，檢測(cè)滲透壓；
7) 盡快過(guò)濾、分裝，封好瓶口，避免漏氣，2~8℃保存；
8) 采用一次性濾器時(shí)濾后檢查濾膜，有無(wú)漏、裂、是否很臟或是有未溶解物；采用不銹鋼濾器（內(nèi)置可反復(fù)用的除菌濾芯）需進(jìn)行濾器的完成性檢測(cè)；
9) 過(guò)濾前、中、后三段采樣進(jìn)行無(wú)菌檢測(cè)，同時(shí)，留取樣品置于37℃培養(yǎng)，至該批培養(yǎng)基用完；
10) 完整記錄整個(gè)過(guò)程每一個(gè)步驟，便于追溯。
新購(gòu)細(xì)胞培養(yǎng)基或是新批次的細(xì)胞培養(yǎng)基，需小劑量配制，進(jìn)行細(xì)胞適應(yīng)試驗(yàn)，結(jié)果驗(yàn)證可用后，方可進(jìn)行大規(guī)模配制。
（2）配制可高壓滅菌粉末細(xì)胞培養(yǎng)基
1) 其配制用水及配制粉劑的稱取、及配制程序基本同過(guò)濾型培養(yǎng)基配制方法。溶解后高壓，通常在121℃、15psi下滅菌15分鐘。
2) 待細(xì)胞培養(yǎng)液冷卻至室溫，按一定比例加入無(wú)菌的谷氨酰胺溶液、無(wú)菌7.5％（w/v）碳酸氫鈉溶液，加注射用水（水溫20℃～30℃）至規(guī)定體積，混勻。
3) 如果必要，用1mol / L 氫氧化鈉溶液或 1mol /L鹽酸溶液調(diào)pH至所需值。
4) 溶液應(yīng)在2℃－8℃下避光保存。
目前國(guó)內(nèi)工業(yè)化用細(xì)胞培養(yǎng)基主要為干粉型。考慮水質(zhì)量對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)液的影響以及使用方便，國(guó)外實(shí)驗(yàn)室和部分工業(yè)生物制藥企業(yè)開始使用一次性袋子包裝的液體細(xì)胞培養(yǎng)液。鑒于目前運(yùn)輸成本，我們國(guó)內(nèi)生物制藥企業(yè)基本都采用干粉型細(xì)胞培養(yǎng)基，配制培養(yǎng)基要注意以下幾個(gè)共同問(wèn)題：
1) 培養(yǎng)基配制用水的品質(zhì)控制非常重要。
2) 在配制或使用過(guò)程中應(yīng)注意配置說(shuō)明，不可隨意濃縮，因?yàn)椴煌煞莸娜芙庑圆煌?，如葉酸在濃縮的儲(chǔ)存液中會(huì)產(chǎn)生沉淀。
3) 產(chǎn)品說(shuō)明書中都注明干粉細(xì)胞培養(yǎng)基中不包含的成份，常見(jiàn)的有NaHCO3、谷氨酰胺、丙酮酸鈉、HEPES、酚紅等。這些成份中有些是必須加，如NaHCO3、谷氨酰胺，有些則要根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要來(lái)決定。
4) 配制時(shí)要保證充分溶解，NaHCO3、谷氨酰胺等物質(zhì)都要在培養(yǎng)基完全溶解之后才能添加。
5) 所用器皿應(yīng)十分潔凈。
6) 配制好的細(xì)胞培養(yǎng)基應(yīng)馬上過(guò)濾，無(wú)菌保存于2℃－8℃。
三，不同細(xì)胞培養(yǎng)基的除菌方式及注意事項(xiàng)
細(xì)胞培養(yǎng)基滅菌的方式分為高壓滅菌和膜過(guò)濾除菌，不同的培養(yǎng)基由于其營(yíng)養(yǎng)成份不同，滅菌方式也可能不同。
絕大多數(shù)細(xì)胞培養(yǎng)基不適宜高壓滅菌。因?yàn)楦邏簻缇灼茐募?xì)胞培養(yǎng)基中的一些成份，如某些維生素等，因此，在通常的高壓滅菌型細(xì)胞培養(yǎng)基中，配方中的維生素種類與過(guò)濾型培養(yǎng)基相比較少，對(duì)于細(xì)胞生長(zhǎng)不可或缺的谷氨酰胺等，需待高壓后補(bǔ)充到培養(yǎng)基中。在高壓過(guò)程中，滅菌用器皿的選擇應(yīng)注意避免蒸發(fā)或是污染。在大規(guī)模工業(yè)化生產(chǎn)中，可以采用短時(shí)超高溫處理的方法進(jìn)行流水線式的滅菌，能夠提高自動(dòng)化生產(chǎn)效率，降低成本。
膜過(guò)濾除菌是當(dāng)前較為常用及便捷的一種方法，常采用0.2μm孔徑的濾膜，部份采用0.1μm孔徑，與高壓過(guò)濾方式相比，雖然濾膜具有使用期限且價(jià)格較高，但對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)基的營(yíng)養(yǎng)成份破壞性較小。
四，不同細(xì)胞培養(yǎng)基存儲(chǔ)過(guò)程中的注意事項(xiàng)
通常液體細(xì)胞培養(yǎng)基避免- 20 ℃凍存，因?yàn)榻鈨鰰r(shí)可能會(huì)有營(yíng)養(yǎng)成份析出，影響培養(yǎng)效果；正常情況下于2℃~8℃避光保存，使用前從冰箱取出，放入室溫進(jìn)行平衡。通常的液體培養(yǎng)基有效期是6個(gè)月到12個(gè)月。液體細(xì)胞培養(yǎng)基盡量避免長(zhǎng)期貯存，其中的谷氨酰胺會(huì)隨著儲(chǔ)存時(shí)間的延長(zhǎng)而慢慢分解，如果細(xì)胞生長(zhǎng)不良，可考慮檢測(cè)培養(yǎng)基中的谷氨酰胺含量確定是否再補(bǔ)加谷氨酰胺。市售商業(yè)化液體細(xì)胞培養(yǎng)基有具體的有效期，對(duì)于使用干粉細(xì)胞培養(yǎng)基自行配制成液體以后，也應(yīng)低溫（2℃~8℃）貯存，除培養(yǎng)基中如谷氨酰胺易降解之外，培養(yǎng)基中的其他成份隨著溫度的升高也可能會(huì)發(fā)生降解或是析出。
在國(guó)內(nèi)傳統(tǒng)的生物制品生產(chǎn)過(guò)程中，配制的細(xì)胞培養(yǎng)基過(guò)濾后用轉(zhuǎn)瓶進(jìn)行分裝，為防止液體過(guò)濾及分裝時(shí)可能存在的污染性問(wèn)題，常采用配制后于37℃擱置一段時(shí)間（7~14天），無(wú)菌方敢使用，但是對(duì)比試驗(yàn)顯示，低溫貯存的細(xì)胞培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞的效果好于37℃存貯，通常對(duì)于過(guò)濾設(shè)備的驗(yàn)證合格后，過(guò)濾過(guò)程中間隔取樣進(jìn)行無(wú)菌驗(yàn)證即可；并且大批量長(zhǎng)時(shí)間的高溫貯存除可能對(duì)營(yíng)養(yǎng)成份造成降解外，場(chǎng)地及高溫的保持也造成了生產(chǎn)成本的提高。目前，對(duì)于一些較大規(guī)模的生物制品廠家，已經(jīng)實(shí)現(xiàn)管道化配制、使用，污染的安全性明顯降低。
工業(yè)化生產(chǎn)中通常采購(gòu)干粉細(xì)胞培養(yǎng)基，與液體培養(yǎng)基相比，存儲(chǔ)方便且價(jià)格便宜，干粉細(xì)胞培養(yǎng)也應(yīng)長(zhǎng)期貯存在2~8℃，尤其是對(duì)于一些營(yíng)養(yǎng)豐富的低血清和無(wú)血清細(xì)胞培養(yǎng)基，成份復(fù)雜且含量較高，有些成分的溶解性較低，生產(chǎn)過(guò)程中采用特殊的加工工藝提高其溶解性的同時(shí)，如果長(zhǎng)期的高溫或極端低溫條件，也有可能改變其理化性質(zhì)，在購(gòu)買或是使用過(guò)程中，須嚴(yán)格按照產(chǎn)品說(shuō)明書進(jìn)行存儲(chǔ)。