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金黃色葡萄球菌的實驗室鑒定!
小吳 / 2019-05-14 09:10:36

          金黃色葡萄球菌 (Staphylococcus aureus ) 是人類的一種重要病原菌,隸屬于葡萄球菌屬(Staphylococcus),有“嗜肉菌"的別稱,是革蘭氏陽性菌的代表,可引起許多嚴重感染。而對于金黃色葡萄球菌在速凍食品中的存在量,衛(wèi)生部于2011年11月24日公布食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)《速凍面米制品》,允許金葡菌限量存在。
1.標(biāo)本采集采自不同感染部位的各種標(biāo)本,包括血液、腦脊液、穿刺液;痰液、膿液、創(chuàng)傷分泌物、尿液、糞便和嘔吐物等。
2.直接涂片鏡檢直接涂片檢查在正常情況下呈無菌狀態(tài)的體液標(biāo)本如血液、腦脊液、穿刺液等,若有檢出革蘭氏陽性,顯微鏡下呈葡萄狀排列、無芽胞、莢膜,直徑0.5-1μm的球菌。即具有重要的臨床價值。
3.分離培養(yǎng)可以選用普通營養(yǎng)瓊脂平板、血平板和高鹽甘露醇平板,血平板用葡萄糖肉湯增菌培養(yǎng)基。該菌在普通肉湯中呈均勻迅速混濁生長;若接種于瓊脂平板上35℃過夜后可形成直徑約2~3mm的厚菌落、濕潤有光澤、呈金黃色不透明圓形凸起。若接種于血平板,菌落周圍可形成明顯的透明的β—溶血環(huán)。在高甘露醇平板上金黃色葡萄球菌生成淡橙黃色菌落,以此可與其他凝固酶陰性的葡萄球菌相鑒別。
4.鑒別實驗
(1)血漿凝固酶試驗:血漿凝固酶是金黃色葡萄球菌所產(chǎn)生的,與其致病力有關(guān)的一種侵襲性酶,其作用是使血漿中的纖維蛋白在菌體表面沉積和凝固以阻礙吞噬細胞的吞噬。血漿凝固酶分為結(jié)合型和游離型。前者結(jié)合在細菌的細胞壁上,能直接作用于血漿中的纖維蛋白原,使之轉(zhuǎn)化為纖維蛋白,環(huán)繞菌體而形成凝塊。而游離型血漿凝固酶則在產(chǎn)生后被分泌到菌體外,不能直接作用于纖維蛋白原,但可以激活血漿凝血酶原,使之轉(zhuǎn)化成凝血酶,后者再作用于纖維蛋白原使其轉(zhuǎn)化為纖維蛋白。具體的測量方法也因此分為玻片法和試管法兩種。
       玻片法將待試菌落乳化于玻片上的鹽水中,經(jīng)10~20S證實無自凝后,用接種環(huán)取人或兔血漿一環(huán),與乳化菌液混合,出現(xiàn)凝集者為陽性,另設(shè)生理鹽水為陰性對照。
       試管法吸取0.5mL兔血漿與0.5mL金黃色葡萄球菌肉浸液肉湯24小時培養(yǎng)物充分混勻,置37℃培養(yǎng),每隔半小時觀察一次,連續(xù)觀察6小時,出現(xiàn)凝固,即將小試管傾斜或倒置時,內(nèi)容物不流動,判為陽性。
(2)耐熱核酸酶試驗:將24小時肉湯培養(yǎng)物沸水浴處理15min,用接種環(huán)劃線刺種于甲苯胺蘭-DNA平板,35℃培養(yǎng)24小時,在刺種線周圍出現(xiàn)淡粉色者為陽性。本試驗金黃色葡萄球菌為陽性。
(3)甘露醇發(fā)酵實驗金黃色葡萄球菌可發(fā)酵甘露醇。
(4)Staphaurex 膠乳凝集實驗是鑒定金黃色葡萄球菌的一種快速、簡便的商品化直接凝集試驗。其基本原理是在紙片上滴加包被有纖維蛋白原和IgG抗體的聚苯乙烯膠乳,然后用接種環(huán)挑取待鑒定菌株的新鮮培養(yǎng)物加入混勻,若出現(xiàn)凝集塊現(xiàn)象即為陽性。
(5)生化鑒定如上述,注意與其他凝固酶陽性的葡萄球菌的鑒別要點:PYR(吡咯烷酮-β-萘基酰胺試驗陰性;VP試驗陽性;鳥氨酸脫羧酶試驗陰性。
(6)免疫學(xué)方法用酶聯(lián)免疫吸附試驗和對流免疫電泳方法可檢測金葡菌的磷壁酸抗體。
(7)分子生物學(xué)方法包括PFGE脈沖場凝膠電泳以及酶切圖譜分析等。

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