百歐博偉生物帶您學(xué)習(xí)如何分離培養(yǎng)人的真皮成纖維細(xì)胞？
中國微生物菌種查詢網(wǎng) / 2019-05-10 09:38:11
真皮成纖維細(xì)胞（又稱皮膚成纖維細(xì)胞）屬于由中胚層分化而來的間質(zhì)細(xì)胞。細(xì)胞來源于人正常的皮膚組織，真皮成纖維細(xì)胞是一種貼壁培養(yǎng)方式的細(xì)胞，由于這些細(xì)胞非常容易培養(yǎng)，它們已經(jīng)被廣泛用于細(xì)胞和分子生物學(xué)研究中。
一般而言，成纖維細(xì)胞能夠分泌I型和 III 型膠原等細(xì)胞外基質(zhì)，并且研究表明不同器官中的成纖維細(xì)胞有顯著的不同。
傷口修復(fù)時(shí)，真皮成纖維細(xì)胞由可增殖，可遷移的表型變?yōu)橛惺湛s性的，可重塑基質(zhì)的表型，同時(shí)，它們會(huì)分泌大量的透明質(zhì)酸來應(yīng)對(duì)修復(fù)時(shí)的炎癥反應(yīng)。
首先在分離真皮成纖維細(xì)胞時(shí)要做到在無菌條件下進(jìn)行，打開生物安全柜紫外燈 30min 作無菌處理。
將手術(shù)廢棄的皮膚組織浸泡 75% 酒精，消毒 2min，
將皮膚組織置含 P/S 的 PBS 中清洗至少 3 遍，
然后用眼科剪除去脂肪及結(jié)締組織等，
將皮膚剪成 0.5*0.5 cm 小塊，放入 dish 中，加 0.1% 的 dispase 溶液，封口膜封口，4℃ 冰箱過夜消化，第二天，用鑷子將表皮與真皮分開（薄的那層是表皮，厚的那層是真皮），
將真皮剪碎，移至離心管，用 0.1% 膠原 Ⅰ 型酶+0.1% 膠原Ⅱ型酶+0.1% 膠原Ⅳ型酶+ 37℃ 水浴鍋中消化至少 2 h（視消化程度而定），
用 100 μm 網(wǎng)篩過濾，取濾液，300 g，離心5 min，用完全培養(yǎng)基重懸沉淀，鋪瓶，隔天換液。
以上是皮膚成纖維細(xì)胞分離培養(yǎng)的一種方式，不同的技術(shù)人員分離培養(yǎng)的方法也不同，使用的試劑比例也不盡相同，皮膚成纖維細(xì)胞特異性纖維連接蛋白或波形蛋白表達(dá)檢測(cè)，采用細(xì)胞免疫熒光技術(shù)。細(xì)胞純度可高達(dá)于 90%，所有的細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級(jí)生物安全臺(tái)內(nèi)操作，并請(qǐng)注意防護(hù)，所有廢液及接觸過此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。