跟百歐博偉生物一起學(xué)習(xí)金黃色葡萄球菌的檢驗方法及操作步驟！
中國微生物菌種查詢網(wǎng) / 2019-05-05 17:11:29
跟百歐博偉生物一起學(xué)習(xí)金黃色葡萄球菌的檢驗方法及操作步驟！
1、增菌培養(yǎng)法
(1)檢樣處理：按無菌操作取檢樣25g(ml)，加入225mL滅菌生理鹽水，固體樣品研磨或置均質(zhì)器中制成混懸液。
(2)增菌及分離培養(yǎng)：吸取5ml上述混懸液，接種于7.5%氯化鈉肉湯或胰酪陳大豆肉湯50mL培養(yǎng)基內(nèi)，36℃士1℃培養(yǎng)24h，轉(zhuǎn)種血平板和Baird一Parker平板，36℃士1℃培養(yǎng)24h，挑取血平板上金黃色(有時為白色)菌落進行革蘭氏染色鏡檢及血漿凝固酶試驗。
(3)形態(tài)：本菌為革蘭氏陽性球菌，排列呈葡萄球狀，無芽胞，無莢膜，致病性葡萄球菌菌體較小，直徑約為0.5um～1um。
(4)在肉湯中呈混濁生長，在胰酩膝大豆肉湯內(nèi)有時液體澄清，菌量多時呈混濁生長，血平板上菌落呈金黃色，有時也為白色，大而突起、圓形、不透明、表面光滑，周圍有溶血圈。在Baird一Parker平板上為圓形、光滑凸起、濕潤、直徑為2mm——3mm，顏色呈灰色到黑色，邊緣為淡色，周圍為一混濁帶，在其外層有一透明圈。用接種針接觸菌落似有奶油樹膠的硬度，偶然會遇到非脂肪溶解的類似菌落;但無混濁帶及透明圖。長期保存的冷凍或干燥食品中所分離的菌落比典型菌落所產(chǎn)生的黑色較淡些，外觀可能粗糙并干燥。
(5)血漿凝固酶試驗：吸取1：4新鮮兔血漿0.5mL，放入小試管中，再加人培養(yǎng)24h的金黃色葡萄球菌肉浸液肉湯堵養(yǎng)物0.5mL，振蕩搖勻，置36℃士1℃溫箱或水浴內(nèi)，每半小時觀察一次，觀察6h,如呈現(xiàn)凝固，即將試管傾斜或倒置時，呈現(xiàn)凝塊者，被認(rèn)為陽性結(jié)果。同時以已知陽性和陰性葡萄球菌株及肉湯作為對照。
2、直接計數(shù)方法6.2.1吸取上述1：10混懸液，進行10倍遞次稀釋，根據(jù)樣品污染情況，選擇不同濃度的稀釋液1mL，分別加人三塊Baird一Parker平板，每個平板接種量分別為0.3mL、0.3mL、0.4mL，然后用滅菌L棒涂布整個平板。如水分多不易吸收，可將平板放在36℃士1℃ lh，等水分蒸發(fā)后反轉(zhuǎn)平皿置36℃士1℃培養(yǎng)。
在三個平板上點數(shù)周圍有混濁帶的黑色菌落，并從中任選五個菌落，分別接種血平板，36℃士1℃ 24h培養(yǎng)后進行染色鏡檢、血漿凝固酶試驗，步驟同增菌培養(yǎng)法。
3、菌落計數(shù)：將三個平板中疑似金黃色葡萄球菌黑色菌落數(shù)相加，乘以血漿凝固酶陽性數(shù)，除以5，再乘以稀釋倍數(shù)，即可求出每克樣品中金黃色葡萄球菌數(shù)。