由于影響因素過多，細(xì)胞/組織培養(yǎng)中出現(xiàn)的一些問題往往很難分析并得到解決，因此被人戲稱為“黑色藝術(shù)”或“巫術(shù)”。本文列舉了一些動物細(xì)胞/組織培養(yǎng)中常見的問題及解決方法。
1.培養(yǎng)試劑的保存：
血清：-5oC - -20oC 保存，避免反復(fù)凍融。
培養(yǎng)基: 2oC – 8oC避光保存。
完全培養(yǎng)基: 2oC – 8oC避光保存，并在2周內(nèi)用完。
盡量縮短血清和培養(yǎng)基見光的時間
2.培養(yǎng)基中是否應(yīng)加酚紅：
酚紅在培養(yǎng)基中被用來作為pH值的指示劑，中性時為紅色，酸性時為黃色，堿性時紫色。研究表明，酚紅可以模擬固醇類激素的作用，特別是雌激素。為避免固醇類反應(yīng)，培養(yǎng)細(xì)胞尤其是哺乳類細(xì)胞時，應(yīng)使用不加酚紅的培養(yǎng)基。由于酚紅干擾檢測，一些研究人員在做流式細(xì)胞檢測時不使用加酚紅的培養(yǎng)基。
3.液體培養(yǎng)基中谷氨酰胺使用方法：
很多細(xì)胞生長要求在培養(yǎng)液中添加谷氨酰胺。谷氨酰胺在溶液中很不穩(wěn)定，應(yīng)置于-20?C冰凍保存，用前加入培養(yǎng)基中。加有谷氨酰胺的液體培養(yǎng)基4?C 冰箱儲存兩周以上時，應(yīng)重新加入原來量的谷氨酰胺。另一種選擇是使用L-谷氨酰胺的衍生物 - L-alanyl-L-glutamine dipeptide（如啟維益成公司代理的GenDepot的產(chǎn)品Glutaplex配方中含有的成分之一）替代L-谷氨酰胺。Glutaplex與L-谷氨酰胺相比更加穩(wěn)定，降解比較慢，提高細(xì)胞的存活和生長，極大降低對細(xì)胞有毒性的氨的積累。