細(xì)胞鋪板不均勻？了解這3種手法技巧后竟如此簡(jiǎn)單！
中國(guó)微生物菌種查詢網(wǎng) / 2019-04-12 08:41:49
為什么把細(xì)胞鋪均勻就那么的難?那是因?yàn)槟銢]有掌握好手法!
注意，是手法，學(xué)霸姐姐做了這么多實(shí)驗(yàn)，也是在無數(shù)次鋪細(xì)胞不均勻的情況下，才知道還有手法這一說，一個(gè)簡(jiǎn)簡(jiǎn)單單的鋪細(xì)胞也出來這么多門道。
什么米字法、十字法、螺旋法、還有搖板子要拿起來搖、 或者一定要放在臺(tái)子上磨（那種板子與臺(tái)子摩擦出來尖銳的聲音...... 最后放進(jìn)孵箱之前,還生怕幾步路搖壞了才鋪好的板子........
學(xué)霸姐姐也是這樣過來的！不過大多數(shù)技巧其實(shí)并沒有太大的用處，學(xué)霸姐姐自己總結(jié)了最實(shí)用的細(xì)胞鋪板的3種手法技巧，有了這些手法，細(xì)胞鋪均勻不是事兒！
首先，我們來看看細(xì)胞鋪板不均勻的3種情況：
1，中間多，周圍少
2，中間少，四周多
3，呈現(xiàn)一坨一坨的
這么多種不均勻的情況，到底該怎么拯救呢？我們一起來看看細(xì)胞鋪板的三種手法：
手法一：均勻單層
要鋪成那種很均勻的單層細(xì)胞，手法如下：
1，細(xì)胞板子先加入一定量(一般是總量培養(yǎng)基的1/5)的培養(yǎng)基，放入孵箱中放置10-20min。
2，在滴入細(xì)胞時(shí)，細(xì)胞板子與通風(fēng)櫥有一定的角度，沿著板壁的孔邊緣滴入。
3，滴入后，呈“8”字方法搖晃5-8次。
4，置于水平臺(tái)上，放置10-20分鐘
5，放入孵箱。
在細(xì)胞鋪板時(shí)，每一種板子的孔面積有多大，培養(yǎng)的液體量以及加入細(xì)胞量。
手法二：中間少，周圍多
其實(shí)細(xì)胞鋪板不一定都需要單個(gè)單個(gè)的那么均勻，比如，做免疫熒光時(shí)，學(xué)霸姐姐喜歡鋪中間少，周圍稍多的板子，
因?yàn)檫@個(gè)樣子可以同時(shí)檢測(cè)到單個(gè)細(xì)胞的形態(tài)，另外又可以照一點(diǎn)低倍的用作于統(tǒng)計(jì)，所有的細(xì)胞都在一個(gè)環(huán)境中。
特別說明一下：這里的多也只是相對(duì)于多，細(xì)胞也是單層的。
中間
周圍
要鋪這樣的細(xì)胞樣子，那鋪細(xì)胞時(shí)要注意手法了：
1，細(xì)胞板子不需要提前用培養(yǎng)基潤(rùn)洗，直接從邊上滴入混有細(xì)胞的培養(yǎng)基。
2，放置30s-1min后，前后搖晃5-8次。
3，放在水平臺(tái)上靜置2-5min。
4，放入孵箱。
手法三：中間多，周圍少
學(xué)霸姐姐一般在提取蛋白或者提取RNA的時(shí)候有時(shí)會(huì)這樣鋪板，因?yàn)橛行┘?xì)胞刮刀不好用，沒有辦法刮到周圍的，想要鋪中間多，周圍少的板子，手法如下：
1，細(xì)胞板子不需要提前潤(rùn)洗，從中間滴入進(jìn)去后。
2，把板子朝一個(gè)方向順時(shí)針或者逆時(shí)針旋轉(zhuǎn)3-5圈。
3，水平臺(tái)上靜置2-5min。
4，放入孵箱。
給大家看看學(xué)霸姐姐做免疫熒光單個(gè)細(xì)胞的時(shí)候鋪的板子：
總結(jié)一下：想要細(xì)胞鋪板鋪得好，背景知識(shí)很重要
其實(shí)在鋪細(xì)胞的時(shí)候，你要準(zhǔn)確的知道你所養(yǎng)的細(xì)胞的特性，比如：
1，細(xì)胞的名稱，來源。
2，細(xì)胞的屬性。
3，細(xì)胞分裂時(shí)間。
還有，最主要的是要搞清楚你的細(xì)胞的生長(zhǎng)曲線，還要知道鋪板后多久可以到達(dá)什么細(xì)胞密度。
如果你準(zhǔn)確的掌握了你的細(xì)胞特性，那鋪板是分分鐘搞定的事情。
細(xì)胞鋪板后，細(xì)胞狀態(tài)不好怎么辦？
如果出現(xiàn)這種情況，學(xué)霸姐姐建議你從以下幾個(gè)方面考慮一下原因：
1，用來鋪板的細(xì)胞狀態(tài)本身就不好。
2，用來鋪板的細(xì)胞傳代次數(shù)太多，有些老化。
3，胰酶消化時(shí)間過長(zhǎng)。
4，中和的血清量及時(shí)間不夠。
5，支原體污染。
細(xì)胞鋪板是一個(gè)經(jīng)驗(yàn)積累的過程，你的手法也需要積極的改進(jìn)，不要生搬硬套，也不要一味追求絕對(duì)的鋪均勻，在實(shí)驗(yàn)過程中多思考細(xì)胞本身的特征和屬性，出現(xiàn)問題積極解決即可。
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