水生微生物實(shí)驗(yàn)法-水中糞鏈球菌群的增菌培養(yǎng)與分離
中國(guó)微生物菌種查詢網(wǎng) / 2019-02-21 09:45:59
糞鏈球菌是腸道鏈球菌類(lèi)的一個(gè)菌群、與食物中毒有關(guān)，屬人類(lèi)致病菌。常存于人與動(dòng)物所排出的糞便及生活用水中，如海水游泳場(chǎng)、淡水游泳池和一般糞便污染的水源及飲用水都有可能檢查到糞鏈球菌，鏈球菌的菌落較?。ㄖ睆郊s0.5毫米）、圓形、突起、灰白色、半透明或不透明、表面光滑、有乳光。不同菌株的菌落周?chē)胁煌兓?br />
1 ．增菌培養(yǎng)
增菌培養(yǎng)基成分及制備．匹克增菌液：
1 ％胰蛋白胨的心肌浸液200毫升
1 : 25000結(jié)晶紫鹽水溶液10 毫升
1 ：800三氮化鈉溶液10 毫升
脫纖維兔血（或羊血）10 毫升
將上列已滅菌的各成分，無(wú)菌地依次混和均勻，分裝于試管、每管2 毫升，保存冰箱備用。
2 ．接種培養(yǎng)
（1）如果污染較嚴(yán)重的水樣，可直接把樣品接種于匹克增菌液中，若污染較輕度需要采用濾膜法先將細(xì)菌濃集，而后放于增菌液中。
（2）將已接種的匹克增菌液置44.5℃的水浴中培養(yǎng)至出現(xiàn)明顯的渾濁。
（3）挑取渾濁液．涂片，染色，鏡檢和觀察其形態(tài)。若其形態(tài)和上面所述的一致，可初步視為糞鏈球菌。
3 ．分離純化培養(yǎng)
（1）培養(yǎng)基成分及其制備：
① 酪氨酸山梨醇醋酸亞鉈瓊脂基礎(chǔ)培養(yǎng)基：
蛋白胨10 克
酵母膏l(xiāng) 克
山梨醇2 克
酪氨酸5 克
瓊脂12 克
蒸餾水1000 毫升
將各成分溶化后分裝于250毫升三角瓶中．每瓶100 毫升，112℃蒸氣下滅菌10分鐘。即為基礎(chǔ)培養(yǎng)基。
完全培養(yǎng)基：調(diào)基礎(chǔ)培養(yǎng)基的pH 為6.2 后，無(wú)菌地按基礎(chǔ)培養(yǎng)基的比例加入以下成分即成。
三苯四唑化氮0.01%
醋酸亞鉈%
山梨醇0.4%
將滅菌后的基礎(chǔ)培養(yǎng)基立即注入培養(yǎng)皿為底層，然后每皿內(nèi)加一層完全培養(yǎng)基，則得雙層平板培養(yǎng)基。用于分離鏈球菌。
② 醋酸亞鉈瓊脂：
醋酸亞鉈l 克
蛋白胨10 克
酵母膏10 克
葡萄糖10 克
瓊脂13 克
蒸餾水1000毫升
將各成分溶于水、調(diào)pH 為6.0，煮沸1分鐘分裝入三角瓶．每瓶100 毫升，15 磅滅菌15 分鐘，冷至50℃ ，每100 毫升中加1%三苯基四唑化氮（TTC ）溶液1 毫升，混合均勻，制成平板。
此培養(yǎng)基用于鑒別鏈球菌。接種物在這種瓊脂平板上，于35-37 ℃ 培養(yǎng)12 小時(shí)后，可觀察到：糞鏈球菌菌落中央紅色，有或無(wú)窄的白色邊緣；乳鏈球菌菌落深紅色．堅(jiān)忍鏈球菌、牛鏈球菌等菌落為粉紅色或微紅色．
（2）分離接種：
① 將增菌培養(yǎng)物在分離瓊脂平板培養(yǎng)基上劃線或涂布接種，或?qū)⒔?jīng)水樣過(guò)濾的集菌濾膜直接貼于分離瓊脂平板培養(yǎng)基上（濾紙與平板上不得含氣泡）
② 于44.5℃的厭氧條件下培養(yǎng)至長(zhǎng)出明顯的菌落。如不純可重復(fù)以上步驟在平板培養(yǎng)基上劃線純化．最后接種于斜面培養(yǎng)基上密封保存，以便做生理生化和血清鑒定用。
另法是．從分離瓊脂平板上挑選暗色的鏈球菌菌落于鑒別瓊脂平板上涂布或劃線接種，于35-37℃ 下培養(yǎng)，12 小時(shí)后，長(zhǎng)出明顯菌落，選其菌落中央紅色、邊緣白色的菌落，接種純化．