蠟樣芽孢桿菌中毒的臨床癥狀與病源分布以及檢測(cè)！
中國(guó)微生物菌種查詢(xún)網(wǎng) / 2019-02-16 09:23:13
蠟樣芽孢桿菌中毒的臨床癥狀與病源分布
蠟樣芽孢桿菌為產(chǎn)大型芽孢的革蘭氏陽(yáng)性桿菌，與沙門(mén)氏菌、大腸桿菌等相比，更耐受高溫和化學(xué)處理。
全球食源性疾病中大約有5％是由蠟樣芽胞桿菌引起的，食用蠟樣芽胞桿菌超標(biāo)的食品可能導(dǎo)致嘔吐、腹瀉等食物中毒癥狀。嘔吐型是由一種小分子量、耐熱的腸毒素引起，腹瀉型是由種大分子量的腸毒素所致。快速、簡(jiǎn)便地檢測(cè)出樣本中潛在的蠟樣芽孢桿菌對(duì)防治其所引起的食源性疾病非常重要。
可引起腹瀉型中毒的相關(guān)食品有肉類(lèi)，牛奶、蔬菜和魚(yú)等，嘔吐型中毒發(fā)作通常與谷類(lèi)、淀粉類(lèi)食品相關(guān)。食品混合物如調(diào)味汁、布丁、湯類(lèi)、砂鍋菜、糕點(diǎn)和沙拉等也會(huì)出現(xiàn)蠟樣芽孢桿菌的污染。
傳統(tǒng)蠟樣芽孢桿菌檢測(cè)方法
細(xì)菌學(xué)分析手冊(cè)上介紹了兩種不同的蠟樣芽孢桿菌檢測(cè)方法：利用甘露醇卵黃多粘菌素瓊脂培養(yǎng)基(MYP)的平板計(jì)數(shù)法和利用添加0.1％硫酸多粘菌素的胰蛋白胨大豆肉湯(TSB)的MPN法。其中，MPN法比MYP檢出的菌量要高。
此外，由于MYP平板無(wú)緩沖能力，非蠟樣芽孢桿菌產(chǎn)生的酸容易遍及整個(gè)平板，使得菌落都不能呈現(xiàn)粉紅色，難以區(qū)分發(fā)酵甘露醇和不發(fā)酵甘露醇的菌落。另外MYP對(duì)受傷的蠟樣芽孢桿菌有微弱的傷害。
實(shí)時(shí)快速微生物熒光光電檢測(cè)方法
BioLumix實(shí)時(shí)快速微生物熒光光電檢測(cè)系統(tǒng)是2008年在美國(guó)推出的用于衛(wèi)生監(jiān)督、食品、乳制品、肉制品、飲料、餐飲、營(yíng)養(yǎng)保健品、制藥等領(lǐng)域的微生物快速檢測(cè)系統(tǒng)。本系統(tǒng)可以快速確定樣本中細(xì)菌總數(shù)、大腸菌群、大腸桿菌、沙門(mén)氏菌、假單胞菌、葡萄球菌、革蘭氏陰性菌、蠟樣芽孢桿菌異養(yǎng)菌、酵母菌、霉菌、乳酸菌等多種微生物的存在與數(shù)量，同時(shí)可以實(shí)現(xiàn)衛(wèi)生監(jiān)控、保質(zhì)期預(yù)測(cè)、腐敗菌檢測(cè)、無(wú)菌檢驗(yàn)、挑戰(zhàn)實(shí)驗(yàn)、微生物限定檢測(cè)、嗜熱菌計(jì)數(shù)、嗜冷菌計(jì)數(shù)以及抗生素殘留檢測(cè)。
BioLumix專(zhuān)利技術(shù)通過(guò)將染色、新的光源和光傳感器相結(jié)合，能夠用同個(gè)檢測(cè)器同步檢測(cè)顏色和熒光信號(hào)的變化。當(dāng)代謝過(guò)程發(fā)生時(shí)，試劑的光譜模式會(huì)發(fā)生改變。光傳感器可檢測(cè)到這些改變，并以預(yù)先設(shè)定的6分鐘為間隔進(jìn)行監(jiān)控。BioLumix實(shí)時(shí)快速微生物檢測(cè)系統(tǒng)已獲得美國(guó)食品藥品監(jiān)督管理局(FDA)的官方認(rèn)證，并被授予DMF(Drug Master File)的藥品主文件號(hào)。
BioLumix實(shí)時(shí)快速微生物熒光光電檢測(cè)系統(tǒng)是一款全自動(dòng)微生物檢測(cè)系統(tǒng)。該系統(tǒng)采用最新研發(fā)的染色技術(shù)檢測(cè)生物體的代謝過(guò)程。這一技術(shù)將染色、新光源和光傳感器結(jié)合在一起，使之能夠用同一個(gè)檢測(cè)器同步檢測(cè)顏色和熒光的變化。目標(biāo)微生物在該培養(yǎng)基中的生長(zhǎng)和測(cè)定可通過(guò)感光試劑進(jìn)行檢測(cè)(色彩和熒光染色)。該系統(tǒng)由3部分組成：檢測(cè)儀器、一次性檢測(cè)管和具有條碼讀取功能的分析軟件(見(jiàn)圖1)，且該軟件基于Windows系統(tǒng)，適用于GMP、HACCP 21 CFR第11部分(在分析實(shí)驗(yàn)室中的應(yīng)用)和ISO 9000標(biāo)準(zhǔn)。
檢測(cè)儀器的靈敏度為每個(gè)樣本管內(nèi)出現(xiàn)一個(gè)細(xì)菌或真菌的活細(xì)胞。檢測(cè)時(shí)間取決于樣品中微生物的初始濃度。污染程度越高的樣本檢測(cè)得越快，并可迅速發(fā)出污染警告。如果樣品中細(xì)菌總數(shù)初始濃度為10°cfu／ml(每毫升10萬(wàn)個(gè)細(xì)胞)，則檢測(cè)僅需4-5個(gè)小時(shí)。
使用步驟非常簡(jiǎn)單，將樣本、拭子或?yàn)V膜接種在制備好的檢測(cè)管中(1～5毫升的液體樣本或1：10的固體稀釋液可直接加到檢測(cè)管中)，然后把檢測(cè)管放進(jìn)儀器，在系統(tǒng)中記錄樣品和化驗(yàn)鑒定結(jié)果。
蠟樣芽孢桿菌的快速檢測(cè)
蠟樣芽孢桿菌檢測(cè)管(BCP)是美國(guó)BioLumix公司2011年最新推出的次性檢測(cè)管(見(jiàn)圖2)。管內(nèi)液體培養(yǎng)基中含有蛋白胨、酪蛋白消化劑、酵母提取物和丙酮酸鈉等，可以促進(jìn)受損芽孢桿菌細(xì)胞的復(fù)蘇，同時(shí)加入氧化錳來(lái)幫助孢子的發(fā)芽。培養(yǎng)基中的抑制劑包括防止霉菌酵母菌的生長(zhǎng)的放線(xiàn)菌酮和氧化鋰、放線(xiàn)菌酮以及多粘菌素B等抑制劑。
BCP的原理是通過(guò)檢測(cè)微生物生長(zhǎng)代謝過(guò)程中產(chǎn)生的二氧化碳的量來(lái)判定微生物的生長(zhǎng)狀況。BCP在一次性檢測(cè)管底部嵌入一個(gè)透明的二氧化碳固體傳感器，當(dāng)有二氧化碳進(jìn)入時(shí)傳感器會(huì)從灰黑色變?yōu)辄S色。只有氣體可以穿透這個(gè)傳感器，避免了其他因素的干擾。
蠟樣芽孢桿菌檢測(cè)時(shí)間和特異性驗(yàn)證
在BCP內(nèi)分別加入102～105cfu／ml不同菌量的蠟樣芽孢桿菌，而后置于BioLumix微生物實(shí)時(shí)快速檢測(cè)系統(tǒng)中進(jìn)行測(cè)試。依據(jù)菌量的不同，可分別在5～10小時(shí)左右得到陽(yáng)性檢測(cè)結(jié)果。遠(yuǎn)遠(yuǎn)快于傳統(tǒng)蠟樣芽孢桿菌檢測(cè)方法。
為驗(yàn)證BCP的特異性，在BCP中分別接種了25株革蘭氏陰性菌和21株革蘭氏陽(yáng)性菌(見(jiàn)表1)，接種菌量為105cfu／mL。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明檢測(cè)管中所有革蘭氏陰性菌都沒(méi)有生長(zhǎng)，革蘭氏陽(yáng)性菌中除株糞腸球菌(ATCC 19433)生長(zhǎng)外其余20株菌均未生長(zhǎng)。表明BCP具有良好的選擇性。