1培養(yǎng)基的無(wú)菌檢查及性能檢查
在無(wú)菌檢查方面，每批培養(yǎng)基全數(shù)按使用目的進(jìn)行預(yù)培養(yǎng)，抽取一定數(shù)量的培養(yǎng)基進(jìn)行觀察，應(yīng)無(wú)菌生長(zhǎng)。使用時(shí)應(yīng)仔細(xì)觀察每一個(gè)碟子，觀察其是否有微生物污染，培養(yǎng)基是否干裂或干燥收縮，如有其中任何一項(xiàng)，應(yīng)丟棄該碟子。
在性能檢查方面，經(jīng)過(guò)預(yù)培養(yǎng)的培養(yǎng)基按照應(yīng)測(cè)定的微生物，使用標(biāo)準(zhǔn)菌株進(jìn)行試驗(yàn)。
2菌株準(zhǔn)備
選擇標(biāo)準(zhǔn)菌株，如CMCC(B)、ATCC，但應(yīng)注意使用的菌株代數(shù)不超過(guò)5代。
3微生物方法驗(yàn)證的內(nèi)容
3.1 細(xì)菌、霉菌、酵母菌計(jì)數(shù)方法的驗(yàn)證內(nèi)容
驗(yàn)證試驗(yàn)至少應(yīng)進(jìn)行3次獨(dú)立的平行試驗(yàn)，并分別計(jì)算各試驗(yàn)菌每次試驗(yàn)的回收率。試驗(yàn)菌株為大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、枯草桿菌、白色念珠菌、黑曲霉菌等，菌種要求不得超過(guò)5代，菌液制備為10-100 CFU/ml，驗(yàn)證方法包括試驗(yàn)組、菌液組、稀釋劑對(duì)照組和供試品對(duì)照組。
3.2 控制菌檢查法的驗(yàn)證內(nèi)容
控制菌檢查包括大腸菌群、大腸埃細(xì)菌、金黃色葡萄球菌、沙門(mén)菌、銅綠假單胞菌和生孢梭菌檢查。試驗(yàn)菌株按規(guī)定檢查的控制菌選擇相應(yīng)的驗(yàn)證菌，如驗(yàn)證大腸埃希菌、大腸菌群和沙門(mén)菌時(shí)的陰性對(duì)照菌株為金黃色葡萄球菌。
3.3 細(xì)菌、霉菌、酵母菌計(jì)數(shù)方法的驗(yàn)證結(jié)果判斷指標(biāo)
根據(jù)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，可以計(jì)算供試組的菌回收率、稀釋劑對(duì)照組的回收率。具體方法為: 首先, 在3 次獨(dú)立的平行試驗(yàn)中, 稀釋劑對(duì)照組的菌回收率應(yīng)均不低于70%。其次, 若試驗(yàn)組的菌回收率均不低于70%。最后, 若任一次試驗(yàn)中試驗(yàn)組的菌回收率低于70%, 應(yīng)采用培養(yǎng)基稀釋法、離心沉淀集菌法、薄膜過(guò)濾法、中和法等方法或聯(lián)合使用這些方法消除供試品的抑菌活性, 并重新進(jìn)行驗(yàn)證。
3.3 控制菌方法驗(yàn)證的結(jié)果判斷
按照2010年《中國(guó)藥典》的規(guī)定，陰性菌對(duì)照組不得檢出陰性對(duì)照菌。若試驗(yàn)組檢出試驗(yàn)菌, 按此供試液制備法和控制菌檢查法進(jìn)行供試品的該控制菌檢查。試驗(yàn)組未檢出試驗(yàn)菌, 應(yīng)采用稀釋法、離心沉淀集菌法、薄膜過(guò)濾法、中和法等方法或聯(lián)合使用這些方法消除供試品的抑菌活性,并重新進(jìn)行驗(yàn)證。
4培養(yǎng)基的無(wú)菌檢查及性能檢查
藥品微生物檢查是控制藥品質(zhì)量的重要指標(biāo)之一,藥品染菌程度直接影響其內(nèi)在質(zhì)量.藥品被微生物污染,其有效成分會(huì)遭到破壞,從而失去有效性，因此，微生物方法驗(yàn)證通過(guò)后, 應(yīng)嚴(yán)格按驗(yàn)證確立的方法進(jìn)行供試品的微生物檢查。藥品微生物檢查方法驗(yàn)證工作是一個(gè)極繁瑣、復(fù)雜、耗時(shí)耗材的操作過(guò)程, 周期長(zhǎng), 干擾因素多,控制不當(dāng)很難達(dá)到驗(yàn)證要求和效果。這就要求驗(yàn)證單位必須具有良好的實(shí)驗(yàn)環(huán)境、實(shí)驗(yàn)設(shè)施和工作條件, 要求實(shí)驗(yàn)工作者具有一定的理論基礎(chǔ)和工作經(jīng)驗(yàn), 嚴(yán)格按操作規(guī)范進(jìn)行操作, 減少和避免方法驗(yàn)證結(jié)果的誤差，才能確定供試品的檢驗(yàn)條件和方法，保證微生物檢查方法的科學(xué)性和檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。