一、細(xì)胞培養(yǎng)過程中有哪些污染？
細(xì)胞培養(yǎng)污染是指培養(yǎng)環(huán)境中侵入了對細(xì)胞生存有害的成分和造成細(xì)胞變異的異物。體外細(xì)胞培養(yǎng)污染可分為三類：物理性、化學(xué)性及生物性污染。
1、物理性污染：
物理性污染通過影響細(xì)胞培養(yǎng)體系中的生化成分，從而影響細(xì)胞的代謝。
物理性污染的來源：培養(yǎng)環(huán)境中的物理因素，如溫度、放射線、振動、輻射（紫外線或熒光）會對細(xì)胞產(chǎn)生影響。
物理性污染的現(xiàn)象：細(xì)胞、培養(yǎng)液或其他培養(yǎng)試劑暴露在放射線、輻射或過冷過熱的溫度中，可以引起細(xì)胞代謝發(fā)生改變，如細(xì)胞同步化、細(xì)胞生長受抑制，甚至細(xì)胞死亡。
2、化學(xué)性污染
化學(xué)性污染是一些對細(xì)胞有毒性的或?qū)?xì)胞產(chǎn)生刺激的化學(xué)物質(zhì)。
化學(xué)性污染的來源：
未純化的物質(zhì)、試劑、水、血清、生長輔助因子及儲存試劑的容器都可能成為化學(xué)性污染的來源。細(xì)胞培養(yǎng)的必需養(yǎng)分（如氨基酸）若濃度超過了合理的范圍，也會對細(xì)胞產(chǎn)生毒性。同樣，不同細(xì)胞系在最佳培養(yǎng)條件下對血清和緩沖液的要求是不一樣的，在培養(yǎng)中應(yīng)嚴(yán)格控制。
化學(xué)性污染的現(xiàn)象：化學(xué)性污染同樣會使細(xì)胞生長受抑制，甚至細(xì)胞死亡。
3、生物性污染
生物性污染包括比較容易發(fā)現(xiàn)的細(xì)菌、霉菌和酵母的污染，和較難發(fā)現(xiàn)的病毒、支原體和其他細(xì)胞的污染。
生物性污染的來源：
● 取材不慎或處理不當(dāng)
● 空氣塵埃
● 消毒不嚴(yán)
● 操作不當(dāng)
● 試劑尤其是血清污染
生物性污染的現(xiàn)象：
● 細(xì)菌：G+菌較多。
● 真菌：霉菌較多。
● 支原體：不易檢測。
● 病毒：由于病毒有種屬特異性，所以病毒污染的概率比較小。
二、做好預(yù)防污染措施
針對細(xì)胞污染的三個分類，做好如下預(yù)防措施：
1、物理性污染的預(yù)防
● 實(shí)驗室的合理設(shè)計及建立規(guī)范的操作規(guī)程；
● 培養(yǎng)箱應(yīng)放在恒溫的環(huán)境中；
● 培養(yǎng)液及試劑應(yīng)放在固定位置，而且要注意避光，試劑周圍不能放置同位素；
● 從冰箱中取出的培養(yǎng)液應(yīng)在室溫條件中放置一段時間后再進(jìn)行使用，以避免過冷的溫度對細(xì)胞的影響。
2、化學(xué)性污染的預(yù)防
● 使用的所有物質(zhì)都應(yīng)是高純度的，同時正確配制和儲存培養(yǎng)液及試劑。
● 在配制液體和清洗容器時必須使用不含雜質(zhì)的超純水。
● 選用同一批次的血清。
● 在選用器皿時，根據(jù)被培養(yǎng)細(xì)胞的生長特性、培養(yǎng)方式和所用培養(yǎng)液的性質(zhì)來選用適合的器皿來達(dá)到實(shí)驗的準(zhǔn)確性和可靠性。
3、生物性污染的預(yù)防
● 建立規(guī)范的無菌操作程序及各種規(guī)章制度，并嚴(yán)格執(zhí)行。
● 控制環(huán)境污染，同時注意實(shí)驗人員的防護(hù)及無菌服的潔凈和無菌。
● 保證細(xì)胞培養(yǎng)基和器材無菌。
● 在細(xì)胞培養(yǎng)基中加入適量的抗生素。
預(yù)防是防止細(xì)胞培養(yǎng)過程中發(fā)生污染的最好辦法。只有提前做好預(yù)防工作，才能將發(fā)生
污染的可能性降到最小程度。