細(xì)菌常見的染色方法及步驟
中國微生物菌種查詢網(wǎng) / 2018-08-21 09:57:43
一、革蘭氏染色：
革蘭氏染色是細(xì)菌學(xué)中廣泛使用的一種鑒別染色法。細(xì)菌先經(jīng)堿性染料結(jié)晶紫染色，而后經(jīng)碘液進(jìn)行媒染，之后用酒精脫色，在一定條件下有的細(xì)菌媒染后的顏色不會(huì)脫去，有的可以被脫去，前者叫做革蘭氏陽性菌，后者為革蘭氏陰性菌。為方便進(jìn)一步觀察，脫色后再用堿性蕃紅進(jìn)行復(fù)染，陽性菌仍為紫色，陰性菌染成紅色，這就是革蘭氏染色的原理。其步驟包括初染、媒染、脫色、復(fù)染四個(gè)步驟，主要步驟如圖所示：
二、莢膜染色：
一般細(xì)菌的莢膜與染色劑的親和性低，但莢膜通透性高，因此染料可以透過莢膜使菌體著色。一般采用負(fù)染色方法使背景和菌體之間形成一透明區(qū)，將菌體襯托出來便于觀察分辨。莢膜染色的步驟：加一滴6%葡萄糖水溶液在載玻片的一端，無菌操作，挑取細(xì)菌斜面上培養(yǎng)72h左右的膠質(zhì)芽孢桿菌與其混合，加1滴墨汁充分混勻，用推片法制片將菌液鋪成薄層，自然干燥，滴加1-2滴無水乙醇覆蓋涂片，固定1min，自然干燥，在已晾干的涂面上，滴加1%結(jié)晶紫染色液染色，2min后用20%的硫酸銅沖洗數(shù)次，再用自來水沖洗一次，使用擦鏡紙擦干后即可鏡檢。有莢膜的菌菌體呈紫色，背景灰黑色，莢膜不著色呈無色透明圈。如圖：
三、簡單染色：
不同細(xì)菌或者由于觀察者所側(cè)重觀察的內(nèi)容不同，所以使用的染料也有差異，但是簡單染色的方法是一樣的。先按照上述的制片方法制片，制成需要觀察的玻片后，使用相對(duì)應(yīng)的染料滴加到玻片上的菌膜區(qū)域，以覆蓋菌膜為準(zhǔn)。按照不同染料的要求，結(jié)合所觀察的內(nèi)容確定染色時(shí)間，染色時(shí)間到達(dá)時(shí)，進(jìn)行水洗，干燥等步驟。最后得到的玻片加蓋蓋玻片即可進(jìn)行鏡檢。如有需要可以后續(xù)再進(jìn)行油封、蠟封等封片過程。簡單染色過程如下圖：
