空腸彎曲菌復(fù)活說(shuō)明(參考)
一、操作步驟
1.、用75%酒精棉擦拭安瓿管外壁，待酒精揮發(fā)后將安瓿管封口處于酒精燈火焰上燒熱；
2、立即滴一滴無(wú)菌水于封口處，使安瓿管前端裂開(kāi)，用鑷子將裂開(kāi)部分敲掉；
3、用無(wú)菌吸管吸取少量滅菌后的布氏肉湯液體培養(yǎng)基，緩慢加入至安瓿管中將干燥菌體全部溶解；
3、吸取溶解后的菌懸液全部轉(zhuǎn)移至盛有4~5mL布氏肉湯液體培養(yǎng)基的試管中；
4、將試管放入OXIOD 2.5升厭氧罐中，同時(shí)打開(kāi)OXIOD微需氧袋迅速放入?yún)捬豕拗?，蓋子鎖緊后放入37℃保溫箱中進(jìn)行培養(yǎng)。
二、注意事項(xiàng)
1、上述步驟均要求無(wú)菌操作，安瓿管打開(kāi)后要盡快完成復(fù)活操作并進(jìn)行培養(yǎng)，避免時(shí)間過(guò)久造成菌體死亡。
2、第一代菌種生長(zhǎng)較緩慢，需培養(yǎng)2-3d。肉眼觀察液體有渾濁或搖動(dòng)后底部有些菌絲或代謝物生成。
三、所用試劑和容器
OXIOD2.5升厭氧罐，貨號(hào)：AG0025A。
OXIOD微需氧袋，貨號(hào)：CN0025A。
布氏肉湯培養(yǎng)基，貨號(hào)：CM125，FBP濃原液現(xiàn)用現(xiàn)配。
培養(yǎng)基名稱(chēng)：布氏肉湯
培養(yǎng)基成分：胰蛋白胨 10.0g，蛋白胨 10.0g，葡萄糖 1.0g ，酵母浸膏 2.0g 氯化鈉 5.0g，亞硫酸氫鈉(NaHSO3) 0.1g，蒸餾水 1000mL。將各成分溶于蒸餾水中。121℃高壓滅菌15min。最終pH7.0.。FBP濃原液：硫酸亞鐵(FeSO4) 2.5g ，焦亞硫酸鈉(Na2S2O5) 2.5g，丙酮酸鈉(sodium pyruvate) 2.5g；將各成分溶于100mL蒸餾水中，經(jīng)0.20μm濾膜過(guò)濾除菌，存于4℃。每100mL經(jīng)滅菌的基礎(chǔ)液中加1mL，混勻。（注：如實(shí)驗(yàn)需要可加入1號(hào)抗生素液和2號(hào)抗生素液）。1號(hào)抗生素溶液：萬(wàn)古霉素 0.75 g，三甲氧芐氨嘧啶乳酸鹽(trimethoprimlactate) 0.38g ，多粘菌素B 250 000 IU 將各成分溶于500mL蒸餾水中，經(jīng)0.20μm濾膜過(guò)濾除菌。每100mL經(jīng)滅菌的基礎(chǔ)液中加1Ml。2號(hào)抗生素溶液：利福平(rifampicin) 0.2g，三甲氧芐氨嘧啶乳酸鹽 0.2g，多粘菌素B 200 000 IU，放線菌酮(actidione) 2.0g 。將各成分置200mL容量瓶中，加入95%乙醇50mL，振搖使溶解，加入蒸餾水至200mL。過(guò)濾除菌，每100mL經(jīng)高壓滅菌的基礎(chǔ)液中加1mL。
培養(yǎng)溫度：37℃
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