一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/strong>
1.了解菌種衰退的原理．
2.熟悉發(fā)酵菌種活化和復(fù)壯的方法．
二、實(shí)驗(yàn)原理
菌種在傳代過(guò)程中，原有的生產(chǎn)性狀會(huì)逐漸下降，這就是菌種的衰退。衰退是菌株的自發(fā)突變引起的，一旦發(fā)現(xiàn)衰退，就必須進(jìn)行復(fù)壯。復(fù)壯就是通過(guò)純種分離和性能測(cè)定等方法從衰退的群體中找出未衰退的個(gè)體，以達(dá)到恢復(fù)該菌種原有性狀的一種措施。菌種活化就是逐級(jí)擴(kuò)大培養(yǎng)是為了得到純而壯的培養(yǎng)物，即獲得活
力旺盛的、接種數(shù)量足夠的培養(yǎng)物。菌種發(fā)酵有一般需要2-3代的復(fù)壯過(guò)程，因?yàn)楸４鏁r(shí)的條件往往和培養(yǎng)時(shí)的條件不相同，所以要活化,讓菌種逐漸適應(yīng)培養(yǎng)環(huán)境。
三、實(shí)驗(yàn)器材與試劑
1、菌種
側(cè)孢芽胞桿菌斜面保藏菌種
2、實(shí)驗(yàn)器材
天平、手提式電熱滅菌鍋、超凈工作臺(tái)、接種環(huán)、電熱鼓風(fēng)干燥箱、生化培養(yǎng)箱、光學(xué)顯微鏡、電爐、酒精燈、鐵架臺(tái)、玻璃漏斗、試管、三角瓶、載玻片等
3、試劑
葡萄糖、蛋白胨、牛肉膏、氯化鈉、復(fù)紅染色液、結(jié)晶紫染色液、盧哥氏碘液、95%乙醇、番紅染色液、香柏油、氫氧化鈉、鹽酸
四、實(shí)驗(yàn)步驟
1、斜面培養(yǎng)基配方：葡萄糖10g、蛋白胨10g、牛肉膏5g、氯化鈉5g、水1000mL、瓊脂20g、pH值7.2～7.4。
2、按配方準(zhǔn)確稱取所需的藥品，溶解、過(guò)濾、分裝、包扎、滅菌（121℃30min）、冷卻、擺斜面。
3、斜面無(wú)菌檢查。28℃，37℃恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)觀察。
4、接種：無(wú)菌室清潔、紫外燈滅菌、操作人員清潔、消毒、用接種環(huán)接種斜面。
5、培養(yǎng)：37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)1d。
6、重復(fù)轉(zhuǎn)接3代斜面
7、鏡檢。分別用簡(jiǎn)單染色或革蘭氏染色涂片觀察，菌的生長(zhǎng)情況，是否有雜菌。 8、生長(zhǎng)好的菌種置冰箱中保藏備用。
五、注意事項(xiàng)
1、滅菌要徹底，冷氣一定排盡，并保證滅菌溫度和時(shí)間。
2、接種時(shí)要嚴(yán)格按無(wú)菌操作規(guī)程進(jìn)行。