細(xì)菌細(xì)胞的常規(guī)保存方法
中國微生物菌種查詢網(wǎng) / 2017-03-14 08:46:12
在生化科研的過程中，使用標(biāo)準(zhǔn)受體細(xì)胞系（如：大腸桿菌、酵母菌、CHO細(xì)胞系等等）進(jìn)行研究已經(jīng)是非常常規(guī)的手段。在使用各種細(xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn)的時(shí)候，保存細(xì)胞樣本就成了必不可少的一步。一般來說保存細(xì)胞是為了能夠再次使用，所以使用什么方法保存、能保存多長時(shí)間也就至關(guān)重要。當(dāng)再次使用自己保存的細(xì)胞時(shí)，我們肯定不想發(fā)現(xiàn)長滿雜菌的樣本，或是都死了的樣本、亦或者蛋白表達(dá)不出來的樣本。那今天就來說說常見的一些保存細(xì)菌細(xì)胞樣本的方法和時(shí)限。
幾種保存方法
一個(gè)最基本的概念：保存溫度越低，保存時(shí)限更長；溫度越低，對細(xì)胞傷害越大；低溫也不怕，我有防凍劑（e.g.甘油）。下面的表格就是五種常見保存細(xì)菌細(xì)胞的方法和大約時(shí)限。
保存條件溫度°C大約時(shí)間
瓊脂平板 4 4-6周
（AgarPlate）
穿刺培養(yǎng)基 4 3周-1年
?。╯tabculture）
冰凍 -20 1-3年
超低溫冰凍 -20 1-10年
凍干 ≤4 15年+
但是，具體到你用的那一種菌用什么方法保存能夠保存多長時(shí)間，就要視情況而定了，并沒有一個(gè)唯一答案，上表中所列出來的時(shí)限一般來說是適用大部分細(xì)菌樣本的。小編如果要保存一個(gè)細(xì)胞樣本，一般不會費(fèi)時(shí)費(fèi)力來查這個(gè)表的，那怎么辦？問師兄，找?guī)熃憧﹡
短期保存
上表中的瓊脂平板和穿刺培養(yǎng)基都適合于短期保存。這兩種方法都保存在4度冰箱，為避免雜菌，最好用塑料或封口膜（parafilm）對平板或培養(yǎng)瓶進(jìn)行封口，這樣可以拒絕冰箱內(nèi)本身存在的雜菌、霉菌入侵樣本，也可以防止自己的培養(yǎng)基過快失水而變得干燥。小編就曾有一盤放在4度冰箱的菌落樣本，忘記了封口，一個(gè)月后，菌落和瓊脂都變成了木乃伊T_T
長期保存
長期低溫冰凍必然會導(dǎo)致部分細(xì)胞死亡，而且很多時(shí)候我們要把細(xì)胞樣本拿來重新接種做實(shí)驗(yàn)，所以解凍再凍的過程也會導(dǎo)致細(xì)胞死亡。那么起始樣本的細(xì)胞濃度就要達(dá)到一定的高度，這樣在以后保存的過程中就算死亡一些細(xì)胞，我們也還有很多有效細(xì)胞可以用，一般來說這個(gè)起始細(xì)胞密度要達(dá)到10的七次方的樣子（單位：細(xì)胞/mL）。
除了常見抗凍劑甘油外，我們也會添加多糖（polysaccharide）或者葡聚糖（dextran）或某些蛋白質(zhì)用來吸附在細(xì)胞表面形成保護(hù)薄膜，防止在冷凍過程中對細(xì)胞的破壞。
另外在解凍細(xì)胞樣本的時(shí)候，最好在低溫條件下，不要讓整個(gè)細(xì)胞樣本解凍成液體，只要解凍到少量液態(tài)樣本出現(xiàn)就好。這樣也可以幫助更多的樣本存活過一次解-再凍的過程，方便下次或多次使用。
關(guān)于凍干保存，其實(shí)并不是所有的細(xì)菌都適合凍干，有的細(xì)菌沒法在凍干過程中存活。所以如果你實(shí)在需要超長時(shí)間保存（超過十年）你的樣本，一定要自己驗(yàn)證一次，看凍干細(xì)胞再培養(yǎng)能不能成功。
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