錳鹽營養(yǎng)瓊脂的核心原理與使用方法及結(jié)果觀察與判定！
小楊 / 2026-02-05 10:31:00
錳鹽營養(yǎng)瓊脂是一種選擇性、鑒別性培養(yǎng)基，主要用于
嗜熱脂肪芽孢桿菌等芽孢桿菌的分離、計(jì)數(shù)與芽孢檢測，也常用于滅菌效果驗(yàn)證，核心依賴錳離子對芽孢形成的誘導(dǎo)作用。
一、培養(yǎng)基原理
錳鹽營養(yǎng)瓊脂的核心作用機(jī)制是錳離子（Mn²?）誘導(dǎo)芽孢形成 + 基礎(chǔ)營養(yǎng)支持 + 選擇性適配，具體組分及功能如下：
1、基礎(chǔ)營養(yǎng)組分
蛋白胨、牛肉膏/酵母膏：提供氮源、維生素、氨基酸等生長必需物質(zhì)，滿足細(xì)菌繁殖的基礎(chǔ)營養(yǎng)需求；
瓊脂：作為凝固劑，形成固體培養(yǎng)基便于菌落分離和計(jì)數(shù)。
2、關(guān)鍵作用組分：錳鹽（硫酸錳 MnSO?）
錳離子是芽孢形成的關(guān)鍵誘導(dǎo)因子，可激活芽孢桿菌體內(nèi)芽孢形成相關(guān)的酶系統(tǒng)，顯著促進(jìn)芽孢桿菌從營養(yǎng)體向芽孢轉(zhuǎn)化，提高芽孢形成率；
同時(shí)錳離子參與細(xì)菌代謝酶的輔基組成，輔助細(xì)菌在營養(yǎng)有限或環(huán)境脅迫下的生長與代謝。
3、選擇性與鑒別性
培養(yǎng)基營養(yǎng)配比偏向芽孢桿菌需求，且錳離子的存在對非芽孢桿菌生長有一定抑制作用，優(yōu)先支持芽孢桿菌（尤其是
嗜熱脂肪芽孢桿菌）生長；
培養(yǎng)后可通過菌落形態(tài)（圓形、乳白色、表面粗糙）和芽孢染色（顯微鏡下觀察芽孢）直接鑒別目標(biāo)菌。
二、使用方法
（一）培養(yǎng)基制備
1、稱量與溶解
按配方比例稱取錳鹽營養(yǎng)瓊脂干粉（如 28.5g/L），加入 1L 純化水，攪拌均勻后加熱煮沸，直至干粉完全溶解（無需高壓滅菌前過度加熱）。
2、高壓滅菌
121℃、15 lbs（1.05 kg/cm²）高壓蒸汽滅菌 15 min，滅菌后冷卻至50~55℃（手感溫?zé)岵粻C），避免溫度過高燙死接種菌，或過低導(dǎo)致瓊脂凝固。
3、倒平板
在無菌環(huán)境下（超凈工作臺(tái)），將冷卻后的培養(yǎng)基倒入無菌培養(yǎng)皿（直徑 9cm），每皿約 15~20 mL，水平放置待其自然凝固，凝固后倒置備用（防止冷凝水滴落污染）。
（二）接種與培養(yǎng)
1、樣品處理
待檢樣品（如生物指示劑、土壤、食品、滅菌驗(yàn)證樣本）：若為固體樣品，按 1:10 比例加入無菌生理鹽水研磨制成勻漿；若為液體樣品，直接稀釋（根據(jù)樣品濃度選擇 10?¹~10??稀釋度）。
芽孢檢測樣品：可先 80℃水浴加熱 10 min（殺滅營養(yǎng)體，保留芽孢），再接種，提高目標(biāo)菌檢出率。
2、接種方式
傾注法：取 1 mL 稀釋后樣品加入無菌平皿，迅速倒入冷卻的錳鹽營養(yǎng)瓊脂，輕輕旋轉(zhuǎn)混勻，待凝固；
涂布法：取 0.1~0.2 mL 稀釋后樣品，滴加在凝固的平板表面，用無菌涂布棒均勻涂布。
3、培養(yǎng)條件
核心適配嗜熱脂肪芽孢桿菌的嗜熱特性，55~60℃ 需氧培養(yǎng)24~48 h（部分菌株需延長至 72 h），觀察菌落生長。
（三）結(jié)果觀察與判定
1、菌落形態(tài)
嗜熱脂肪芽孢桿菌典型菌落：圓形、直徑 2~5 mm、乳白色或淡黃色、表面粗糙、邊緣整齊，部分菌落中央略凸起。
2、芽孢驗(yàn)證
挑取典型菌落，做芽孢染色，顯微鏡下觀察：芽孢呈綠色，營養(yǎng)體呈紅色，確認(rèn)芽孢形成。
3、計(jì)數(shù)與判定
選擇菌落數(shù)在 30~300 之間的平板計(jì)數(shù)，計(jì)算每克/毫升樣品中嗜熱脂肪芽孢桿菌的數(shù)量；若為滅菌驗(yàn)證，無菌落生長則滅菌合格，有菌落生長則滅菌不徹底。
三、注意事項(xiàng)
錳鹽易氧化，制備時(shí)避免長時(shí)間高溫加熱，防止錳離子失效，影響芽孢誘導(dǎo)效果；
培養(yǎng)溫度需嚴(yán)格控制在 55~60℃，溫度過低會(huì)導(dǎo)致嗜熱菌株生長緩慢或不生長；
平板需現(xiàn)配現(xiàn)用，若需儲(chǔ)存，置于 4℃冰箱，不超過 1 周，使用前提前恢復(fù)至室溫；
操作全程無菌，避免雜菌污染，影響結(jié)果準(zhǔn)確性；
該培養(yǎng)基主要針對嗜熱芽孢桿菌，對其他細(xì)菌（如
大腸桿菌、
葡萄球菌）無選擇性，不可用于廣譜細(xì)菌培養(yǎng)。
北京百歐博偉生物技術(shù)有限公司擁有對菌種、細(xì)胞、培養(yǎng)基、配套試劑等產(chǎn)品需求者的極優(yōu)質(zhì)服務(wù)，對購買項(xiàng)目的前期資料提供,中期合同保證,后期貨物跟蹤到最終售后的確保項(xiàng)目準(zhǔn)確到位，都有相關(guān)人士進(jìn)行維護(hù),確保您在
微生物菌種查詢網(wǎng)中獲得最優(yōu)質(zhì)服務(wù)！也正因?yàn)榇?，北京百歐博偉生物技術(shù)有限公司與國內(nèi)外多家研制單位、生物制藥、第三方檢測機(jī)構(gòu)和科研院所院校、化工企業(yè)有著良好、長期和穩(wěn)定的合作關(guān)系！
下載附件
上一篇：兔乳腺上皮細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)操作要點(diǎn)及應(yīng)用領(lǐng)域與應(yīng)用價(jià)值！
下一篇：微生物實(shí)驗(yàn)室節(jié)前安全三步操作指南！趕緊收藏起來吧！