即用型培養(yǎng)基驗(yàn)證的標(biāo)準(zhǔn)化操作流程及常見問題與解決方案！
小楊 / 2026-02-03 10:36:50
百歐博偉生物：即用型培養(yǎng)基是預(yù)先配制、滅菌并分裝完成的培養(yǎng)基產(chǎn)品，其質(zhì)量直接決定微生物檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。即用型培養(yǎng)基驗(yàn)證是實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制的核心環(huán)節(jié)，需依據(jù)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)或國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)執(zhí)行，驗(yàn)證流程需覆蓋適用性、無(wú)菌性、穩(wěn)定性三大核心指標(biāo)。以下是結(jié)構(gòu)化的即用型培養(yǎng)基驗(yàn)證標(biāo)準(zhǔn)化操作流程（SOP）、質(zhì)量控制要點(diǎn)及常見問題解決方案。
一、驗(yàn)證適用范圍與依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)
1、適用對(duì)象
2、參考標(biāo)準(zhǔn)
中國(guó)：GB 4789.28-2013《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物學(xué)檢驗(yàn) 培養(yǎng)基和試劑的質(zhì)量要求》
國(guó)際：ISO 11133:2014《Microbiology of the food chain - Requirements for media and reagents》
二、驗(yàn)證前準(zhǔn)備
1、人員要求
操作人員需經(jīng)微生物檢測(cè)培訓(xùn)并持證上崗，熟悉培養(yǎng)基特性及無(wú)菌操作規(guī)范。
2、材料與試劑
待驗(yàn)證即用型培養(yǎng)基（記錄批號(hào)、生產(chǎn)日期、有效期）
標(biāo)準(zhǔn)參考菌株（需為標(biāo)準(zhǔn)菌株或標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備菌株，如 ATCC、CMCC 菌株）
無(wú)菌稀釋液（0.85% 無(wú)菌生理鹽水或磷酸鹽緩沖液）
無(wú)菌耗材（移液管、涂布棒、無(wú)菌試管等）
培養(yǎng)設(shè)備（恒溫培養(yǎng)箱、厭氧培養(yǎng)箱等，需校準(zhǔn)）
3、菌株選擇原則
選擇與培養(yǎng)基用途匹配的目標(biāo)菌和質(zhì)控菌，示例如下：
培養(yǎng)基類型 目標(biāo)菌 質(zhì)控菌株
營(yíng)養(yǎng)瓊脂（NA） 通用細(xì)菌 金黃色葡萄球菌 ATCC 25923
麥康凱瓊脂（MAC） 革蘭氏陰性菌（大腸菌群） 大腸埃希氏菌 ATCC 25922
孟加拉紅培養(yǎng)基 霉菌、酵母菌 白色念珠菌 ATCC 10231
三、核心驗(yàn)證項(xiàng)目與操作流程
1、無(wú)菌性驗(yàn)證（必做）
驗(yàn)證培養(yǎng)基是否被污染，是基礎(chǔ)驗(yàn)證項(xiàng)目。
隨機(jī)抽取同一批次即用型培養(yǎng)基的 1%~5% 樣本（至少 3 個(gè)），液體培養(yǎng)基需充分混勻，平板培養(yǎng)基需檢查外觀無(wú)破損。
平板培養(yǎng)基直接倒置放入培養(yǎng)箱，液體培養(yǎng)基無(wú)需接種，密封后放入培養(yǎng)箱。
培養(yǎng)條件：36℃±1℃，培養(yǎng) 18~24 h（真菌培養(yǎng)基 25℃±1℃，培養(yǎng) 48~72 h）。
結(jié)果判定：培養(yǎng)后培養(yǎng)基表面及內(nèi)部無(wú)任何菌落生長(zhǎng)，判定無(wú)菌性合格；若有菌落生長(zhǎng)，整批培養(yǎng)基判為不合格，禁止使用。
2、適用性驗(yàn)證（核心項(xiàng)目）
驗(yàn)證培養(yǎng)基對(duì)目標(biāo)菌的生長(zhǎng)促進(jìn)能力和選擇性（若為選擇性培養(yǎng)基），分為促生長(zhǎng)試驗(yàn)和抑制試驗(yàn)。
（1）促生長(zhǎng)試驗(yàn)操作步驟
菌懸液制備：將標(biāo)準(zhǔn)菌株接種至增菌培養(yǎng)基活化，用無(wú)菌稀釋液制備成 10??~10?? CFU/mL 的菌懸液（濃度以涂布后平板菌落數(shù) 30~300 為宜）。
接種與培養(yǎng)
平板培養(yǎng)基：取 0.1 mL 菌懸液涂布于待驗(yàn)證平板，同時(shí)涂布同配方的實(shí)驗(yàn)室自制合格培養(yǎng)基作為陽(yáng)性對(duì)照。
液體培養(yǎng)基：取 1 mL 菌懸液接種至 10 mL 待驗(yàn)證液體培養(yǎng)基，同時(shí)設(shè)置自制培養(yǎng)基對(duì)照。
培養(yǎng)條件：按目標(biāo)菌最適條件培養(yǎng)（如細(xì)菌 36℃±1℃/18~24 h，真菌 25℃±1℃/48~72 h）。
結(jié)果判定
平板培養(yǎng)基：待驗(yàn)證培養(yǎng)基的菌落數(shù)與對(duì)照培養(yǎng)基的菌落數(shù)比值應(yīng)在 0.7~1.3 之間；菌落形態(tài)、大小、顏色需與對(duì)照一致（如
大腸埃希氏菌在 MAC 上呈紅色菌落）。
液體培養(yǎng)基：待驗(yàn)證培養(yǎng)基的菌液 OD??? 值或菌落計(jì)數(shù)結(jié)果，需與對(duì)照培養(yǎng)基無(wú)顯著差異（差異≤30%）。
（2）抑制試驗(yàn)（僅針對(duì)選擇性培養(yǎng)基）
驗(yàn)證培養(yǎng)基對(duì)非目標(biāo)菌的抑制能力，例如麥康凱瓊脂需抑制革蘭氏陽(yáng)性菌。
取 0.1 mL 菌懸液涂布于待驗(yàn)證選擇性培養(yǎng)基平板，同時(shí)涂布非選擇性培養(yǎng)基（如
營(yíng)養(yǎng)瓊脂）作為陽(yáng)性對(duì)照。
按對(duì)應(yīng)條件培養(yǎng)后觀察結(jié)果。
結(jié)果判定：待驗(yàn)證選擇性培養(yǎng)基上無(wú)菌落生長(zhǎng)或菌落數(shù)≤對(duì)照培養(yǎng)基的 0.1%，判定抑制能力合格。
3、穩(wěn)定性驗(yàn)證（可選，按需執(zhí)行）
驗(yàn)證培養(yǎng)基在有效期內(nèi)的質(zhì)量穩(wěn)定性，適用于需長(zhǎng)期儲(chǔ)存的培養(yǎng)基。
選取同一批次即用型培養(yǎng)基，分別在生產(chǎn)日期、有效期中期、有效期末期三個(gè)時(shí)間點(diǎn)，重復(fù)無(wú)菌性和適用性驗(yàn)證。
結(jié)果判定：三個(gè)時(shí)間點(diǎn)的驗(yàn)證結(jié)果均需合格，且無(wú)顯著差異。
四、質(zhì)量控制要點(diǎn)
1、菌株質(zhì)量控制
標(biāo)準(zhǔn)菌株需定期傳代、凍存，避免過度傳代導(dǎo)致性狀改變；每次驗(yàn)證前需確認(rèn)菌株活化狀態(tài)。
菌懸液濃度需精準(zhǔn)控制，建議采用平板計(jì)數(shù)法或比濁法校準(zhǔn)。
2、環(huán)境與設(shè)備控制
無(wú)菌操作需在超凈工作臺(tái)進(jìn)行，工作臺(tái)需定期檢測(cè)潔凈度；培養(yǎng)箱溫度需每日校準(zhǔn)并記錄。
驗(yàn)證過程需設(shè)置空白對(duì)照（未接種的培養(yǎng)基），排除環(huán)境污染干擾。
3、記錄與追溯
建立《即用型培養(yǎng)基驗(yàn)證記錄表》，記錄內(nèi)容包括：培養(yǎng)基批號(hào)、菌株信息、接種量、培養(yǎng)條件、菌落數(shù)/形態(tài)、判定結(jié)果、操作人員及日期。
驗(yàn)證合格的培養(yǎng)基需貼合格標(biāo)識(shí)，標(biāo)注驗(yàn)證日期；不合格產(chǎn)品需隔離并記錄處理方式。
五、常見問題與解決方案
常見問題 可能原因 解決方案
無(wú)菌性驗(yàn)證出現(xiàn)雜菌 培養(yǎng)基運(yùn)輸破損/儲(chǔ)存不當(dāng) 檢查包裝完整性；儲(chǔ)存條件需符合廠家要求（如 2~8℃冷藏）
促生長(zhǎng)試驗(yàn)菌落數(shù)偏低 培養(yǎng)基營(yíng)養(yǎng)成分失效/pH 偏差 核查培養(yǎng)基有效期；用 pH 計(jì)檢測(cè)液體培養(yǎng)基 pH，確認(rèn)在標(biāo)準(zhǔn)范圍
選擇性培養(yǎng)基抑制能力下降 選擇性添加劑濃度不足 對(duì)比廠家批次報(bào)告；更換批次重新驗(yàn)證
菌落形態(tài)異常 菌株活化不充分/培養(yǎng)基變質(zhì) 重新活化標(biāo)準(zhǔn)菌株；棄用異常批次培養(yǎng)基
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