滅菌后小倒管內(nèi)產(chǎn)生氣泡的原因與解決辦法及預(yù)防措施！
小楊 / 2025-11-18 09:55:19
百歐博偉生物：滅菌后小倒管內(nèi)留有氣泡是一個在微生物實驗室制備培養(yǎng)基（特別是用于檢測產(chǎn)氣反應(yīng)的培養(yǎng)基，如乳糖發(fā)酵管）時非常常見的問題。滅菌后小倒管（杜氏小管）內(nèi)留有氣泡，會影響實驗結(jié)果判讀，甚至導(dǎo)致假陽性或結(jié)果不確定。下面詳細(xì)分析其原因和解決辦法。
一、氣泡產(chǎn)生的主要原因
小倒管內(nèi)的氣泡本質(zhì)上是培養(yǎng)基中溶解的空氣在加熱滅菌后析出，并被困在了倒置的小倒管內(nèi)。具體原因可以分為以下幾類：
1、培養(yǎng)基制備與分裝階段：
培養(yǎng)基煮沸不充分：配制培養(yǎng)基時，如果沒有充分煮沸或煮沸后沒有適當(dāng)冷卻，培養(yǎng)基中會溶解有較多空氣。
分裝速度過快或方式不當(dāng)：向試管中分裝培養(yǎng)基時，如果流速過快、位置過高，或者直接沖擊試管壁/小倒管，會帶入大量空氣。
小倒管預(yù)先放入方式不對：干燥的小倒管內(nèi)部含有空氣，如果直接放入試管，這些空氣在滅菌時就會受熱膨脹逸出，但冷卻時可能又聚集起來。
2、滅菌與冷卻階段（最常見的原因）：
排氣不充分：使用高壓蒸汽滅菌鍋時，如果初始冷空氣沒有排盡，鍋內(nèi)溫度不均勻，會導(dǎo)致局部過熱和壓力變化，促使氣體從培養(yǎng)基中劇烈析出。
降溫冷卻速度過快：滅菌結(jié)束后，如果立即強行快速冷卻（如直接打開鍋門，或放入冷水中急冷），培養(yǎng)基會迅速冷卻收縮，內(nèi)部溶解的氣體來不及重新溶解，就會大量析出并聚集在小倒管這個“氣室”中。
鍋內(nèi)壓力下降過快：與降溫過快同理，壓力的驟降也會導(dǎo)致氣體溶解度降低，氣體析出。
3、小倒管與試管本身的問題：
小倒管不合適：小倒管的規(guī)格與試管不匹配，或者小倒管口有破損，導(dǎo)致氣體容易進入且不易排出。
二、解決辦法與預(yù)防措施
解決這個問題的核心思路是：在滅菌前最大限度地排除空氣，并在滅菌后讓氣體有足夠的時間重新溶解回培養(yǎng)基中。
1、培養(yǎng)基配制與分裝（事前預(yù)防）：
充分煮沸驅(qū)氣：培養(yǎng)基配制后，務(wù)必充分加熱煮沸5-10分鐘，以驅(qū)除大部分溶解的空氣。這是最關(guān)鍵的一步。
緩慢冷卻：煮沸后，不要立即分裝，可將其置于45-50℃水浴中恒溫。這個溫度既高于培養(yǎng)基的凝固點，又能讓氣體進一步析出和逃逸。
沿壁緩慢分裝：分裝時，將移液管或漏斗的尖端靠在試管內(nèi)壁，讓培養(yǎng)基順著管壁緩緩流下，避免沖擊和產(chǎn)生氣泡。
正確放置小倒管：
方法一（推薦）：將小倒管開口朝上放入空試管中，然后再緩慢加入溫?zé)岬呐囵B(yǎng)基。培養(yǎng)基會自然流入小倒管并排出空氣。
方法二：先將培養(yǎng)基分裝到試管，然后用鑷子夾住小倒管，將其開口向下，傾斜著完全浸入培養(yǎng)基中，確保內(nèi)部充滿液體后，再將其豎立在試管底部。這樣可以手動排盡小倒管內(nèi)的空氣。
2、滅菌過程（事中控制）：
確保滅菌鍋排氣充分：嚴(yán)格遵守高壓滅菌鍋的操作規(guī)程，在升溫和壓力上升階段，務(wù)必打開排氣閥，讓冷空氣徹底排出，待噴出均勻的蒸汽流后再關(guān)閉閥門。
避免過度滅菌：按照規(guī)定的溫度和時間進行滅菌，過度加熱會使更多氣體析出。
3、滅菌后處理（事后補救）：
自然緩慢冷卻：這是消除已產(chǎn)生氣泡最有效的方法！滅菌結(jié)束后，讓滅菌鍋自然降壓，待壓力降為零、溫度降至80-90℃左右時再微微打開鍋門，利用鍋內(nèi)余熱使培養(yǎng)基緩慢冷卻至凝固。
原理：緩慢冷卻過程中，培養(yǎng)基內(nèi)的氣體有足夠的時間重新溶解到液體中，小倒管內(nèi)聚集的氣泡會逐漸變小直至消失。
熱水浴驅(qū)除法：如果培養(yǎng)基已經(jīng)凝固但小倒管內(nèi)仍有氣泡，可以進行補救：
將試管放入水浴鍋中，緩慢加熱至85-90℃（培養(yǎng)基剛好融化或接近融化的溫度）。
保持該溫度一段時間，你會看到小倒管內(nèi)的氣泡因受熱膨脹而逸出。
然后從水浴中取出試管，在實驗臺上輕輕敲擊試管底部，震掉殘留的小氣泡。
最后，將其靜置于室溫下極其緩慢地冷卻凝固。大多數(shù)情況下，氣泡都能被消除。
三、總結(jié)
要徹底解決小倒管內(nèi)氣泡問題，推薦采用 “組合拳”：
配制時：充分煮沸，溫浴。
分裝時：沿壁慢加，手動排空小倒管。
滅菌后：重中之重！ 務(wù)必讓培養(yǎng)基在滅菌鍋內(nèi)或溫暖環(huán)境中自然緩慢冷卻。
遵循以上步驟，可以極大地減少甚至完全避免小倒管內(nèi)出現(xiàn)氣泡的問題，確保實驗結(jié)果的準(zhǔn)確性。
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