微生物學(xué)技術(shù)之插片培養(yǎng)法的原理與應(yīng)用及操作步驟！
小楊 / 2025-11-06 09:24:38
一、什么是插片培養(yǎng)法？
插片培養(yǎng)法是一種主要用于觀察和研究放線菌等絲狀微生物自然生長形態(tài)的微生物學(xué)技術(shù)。
它的核心操作是：將一種無菌的薄片材料（即“插片”）垂直插入接種了微生物的固體平板培養(yǎng)基中，經(jīng)過一段時(shí)間的培養(yǎng)后，再將薄片小心地取出，進(jìn)行觀察。
這種方法的最大優(yōu)點(diǎn)是能夠在不破壞菌絲天然結(jié)構(gòu)的情況下，清晰地觀察到微生物在不同空間層次（從培養(yǎng)基深層到表面再到空氣中）的生長狀態(tài)。
二、主要原理
放線菌等絲狀微生物在固體培養(yǎng)基上會呈現(xiàn)兩種主要的生長形態(tài)：
基內(nèi)菌絲：在培養(yǎng)基內(nèi)部生長的菌絲，主要功能是吸收營養(yǎng)。
氣生菌絲：向空氣中生長的菌絲，后期會分化形成孢子絲和孢子。
在常規(guī)的平板培養(yǎng)中，我們只能從上面看到氣生菌絲和孢子，很難觀察到基內(nèi)菌絲的完整形態(tài)，而且挑取菌落會破壞其結(jié)構(gòu)。
插片培養(yǎng)法通過插入一個(gè)惰性的薄片，為菌絲的生長提供了一個(gè)穩(wěn)固的“支架”。菌絲會沿著薄片的表面和內(nèi)部自然地向各個(gè)方向生長，從而在薄片上形成一個(gè)從基內(nèi)菌絲到氣生菌絲再到孢子絲的完整、立體的生長剖面。當(dāng)取出薄片時(shí)，這個(gè)完整的生長結(jié)構(gòu)就被固定在了薄片上，便于在顯微鏡下進(jìn)行觀察。
三、操作步驟
1、準(zhǔn)備插片：
通常使用蓋玻片作為插片，因?yàn)槠浔《该?，非常適合顯微鏡觀察。
將蓋玻片清洗干凈，然后進(jìn)行干熱滅菌或酒精浸泡滅菌，確保無菌。
2、接種培養(yǎng)基：
制備適宜的固體平板培養(yǎng)基。
用劃線法或涂布法在平板表面接種目標(biāo)微生物。
3、插入插片：
用無菌鑷子夾取一片無菌的蓋玻片，以大約45°至60°的角度，輕輕地、垂直地插入已接種的瓊脂培養(yǎng)基中。插入的深度約為蓋玻片長度的1/2到2/3。
一個(gè)平板中可以插入多片蓋玻片。
4、培養(yǎng)：
將平板正置，放入恒溫培養(yǎng)箱中，在適宜的溫度下培養(yǎng)一定時(shí)間（例如，
放線菌通常需要培養(yǎng)5-7天）。
在此期間，微生物會圍繞蓋玻片自然生長。
5、取出與觀察：
培養(yǎng)結(jié)束后，用無菌鑷子小心地、垂直地將蓋玻片從瓊脂中拔出。
此時(shí)，在蓋玻片上會附著有一層生長良好的菌苔。
可以直接將蓋玻片放在載玻片上，置于顯微鏡下觀察。為了更清晰地觀察，有時(shí)會先進(jìn)行簡單染色，再用顯微鏡（低倍鏡或高倍鏡）觀察菌絲和孢子的形態(tài)。
四、主要應(yīng)用與優(yōu)點(diǎn)
觀察微生物自然形態(tài)：是研究
放線菌、
霉菌等絲狀微生物個(gè)體形態(tài)（尤其是基內(nèi)菌絲、氣生菌絲和孢子絲的著生關(guān)系）的經(jīng)典方法。
菌種鑒定：孢子絲的形態(tài)（直形、波浪形、螺旋形等）和孢子的排列方式是鑒定放線菌的重要依據(jù)，插片法為此提供了完美的樣本。
教學(xué)與演示：能非常直觀地展示絲狀微生物的完整結(jié)構(gòu)，是微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)中常用的手段。
非破壞性取樣：可以在不干擾平板其他部分菌落生長的情況下，取出樣本進(jìn)行觀察。
五、局限性
操作要求高：插入和取出蓋玻片時(shí)需要非常小心，否則容易弄碎蓋玻片或破壞菌絲結(jié)構(gòu)。
主要用于絲狀微生物：對細(xì)菌和酵母等單細(xì)胞微生物的應(yīng)用價(jià)值不大。
代表性可能有限：插片上的生長情況可能不能完全代表整個(gè)平板上所有菌落的生長狀態(tài)。
六、總結(jié)
插片培養(yǎng)法是一種巧妙、簡單而有效的微生物學(xué)研究技術(shù)。它通過提供一個(gè)物理支撐，讓我們能夠“捕獲”并觀察絲狀微生物在三維空間中的完整生長全景，在微生物分類學(xué)、形態(tài)學(xué)和基礎(chǔ)研究中具有不可替代的價(jià)值。
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