微生物細(xì)胞大小測(cè)定的具體實(shí)驗(yàn)步驟及其操作全流程！
小楊 / 2025-10-09 09:21:03
百歐博偉生物：微生物細(xì)胞大小測(cè)定的核心實(shí)驗(yàn)方法是顯微測(cè)微尺法，以下是具體且可落地的操作步驟，涵蓋從準(zhǔn)備到數(shù)據(jù)處理的全流程。
一、實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備
1、材料與儀器
微生物樣品：需提前培養(yǎng)至對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期（如
大腸桿菌培養(yǎng)液、
酵母菌懸液），若樣品濃度過(guò)高，需用無(wú)菌生理鹽水適當(dāng)稀釋?zhuān)苊饧?xì)胞重疊。
儀器：光學(xué)顯微鏡（需配備高倍鏡和油鏡）、目鏡測(cè)微尺、鏡臺(tái)測(cè)微尺、載玻片、蓋玻片、無(wú)菌滴管、擦鏡紙、香柏油。
試劑：無(wú)菌生理鹽水（用于稀釋樣品）、二甲苯（用于清潔油鏡鏡頭）。
2、工具檢查與安裝
檢查目鏡測(cè)微尺和鏡臺(tái)測(cè)微尺是否完好，無(wú)劃痕或刻度模糊。
取下顯微鏡目鏡，將目鏡測(cè)微尺的刻度面朝下（確保觀察時(shí)能清晰看到刻度），放入目鏡的視場(chǎng)光闌處，再重新裝回目鏡。
將鏡臺(tái)測(cè)微尺的刻度面朝上，放在顯微鏡載物臺(tái)中央，用壓片夾固定。
二、核心步驟：鏡臺(tái)測(cè)微尺校準(zhǔn)目鏡測(cè)微尺
校準(zhǔn)的目的是確定不同放大倍數(shù)下，目鏡測(cè)微尺每一小格對(duì)應(yīng)的實(shí)際長(zhǎng)度（μm），這是后續(xù)測(cè)量細(xì)胞大小的關(guān)鍵前提。
1、低倍鏡（10× 物鏡）校準(zhǔn)
打開(kāi)顯微鏡光源，調(diào)節(jié)粗準(zhǔn)焦螺旋和細(xì)準(zhǔn)焦螺旋，使鏡臺(tái)測(cè)微尺的刻度清晰成像。
移動(dòng)載物臺(tái)，使鏡臺(tái)測(cè)微尺的某一刻度線與目鏡測(cè)微尺的某一刻度線完全重合（作為起始點(diǎn)）。
沿刻度方向觀察，找到兩組刻度線再次完全重合的位置（作為終點(diǎn)），分別記錄：
目鏡測(cè)微尺重合區(qū)間的格數(shù)（記為 A）
鏡臺(tái)測(cè)微尺重合區(qū)間的格數(shù)（記為 B）
計(jì)算低倍鏡下目鏡測(cè)微尺每小格實(shí)際長(zhǎng)度：
目鏡每小格長(zhǎng)度（μm）=（B×10μm）÷A
（注：鏡臺(tái)測(cè)微尺每小格固定為 10μm，總長(zhǎng) 1mm=100 小格）
2、高倍鏡（40× 物鏡）與油鏡（100× 物鏡）校準(zhǔn)
高倍鏡校準(zhǔn)：將物鏡切換至 40×，重復(fù)低倍鏡校準(zhǔn)的步驟 2-4，計(jì)算高倍鏡下目鏡測(cè)微尺每小格的實(shí)際長(zhǎng)度。
（注意：切換物鏡后需重新調(diào)節(jié)細(xì)準(zhǔn)焦螺旋，確?？潭惹逦?，不可調(diào)節(jié)粗準(zhǔn)焦螺旋，避免壓壞鏡頭和測(cè)微尺）
油鏡校準(zhǔn)：在鏡臺(tái)測(cè)微尺刻度面中央滴一滴香柏油，切換至 100× 油鏡，同樣重復(fù)步驟 2-4，計(jì)算油鏡下的刻度換算值。
（油鏡觀察后，需立即用擦鏡紙蘸少量二甲苯擦拭鏡頭，再用干凈擦鏡紙擦凈殘留二甲苯）
三、微生物細(xì)胞大小測(cè)量
1、樣品制備
取干凈載玻片，用無(wú)菌滴管吸取少量稀釋后的微生物樣品，滴在載玻片中央（約 1-2 滴，避免過(guò)多溢出）。
用鑷子夾取蓋玻片，從樣品一側(cè)緩慢蓋上（避免產(chǎn)生氣泡，氣泡會(huì)影響觀察和測(cè)量），制成壓片。
2、細(xì)胞觀察與測(cè)量
將樣品壓片放在載物臺(tái)中央，先通過(guò)低倍鏡找到清晰的細(xì)胞，再切換至高倍鏡或油鏡（細(xì)菌需用油鏡，酵母菌用高倍鏡即可）。
選取視野中形態(tài)完整、無(wú)重疊的細(xì)胞（至少 10-20 個(gè)，保證數(shù)據(jù)代表性），分別測(cè)量：
球菌：測(cè)量其直徑（目鏡測(cè)微尺覆蓋的格數(shù)）
桿菌：測(cè)量其長(zhǎng)度和寬度（分別記錄對(duì)應(yīng)的格數(shù)）
記錄每個(gè)細(xì)胞對(duì)應(yīng)的目鏡測(cè)微尺格數(shù)，結(jié)合校準(zhǔn)好的“目鏡每小格實(shí)際長(zhǎng)度”，計(jì)算細(xì)胞的實(shí)際大?。?/div>
細(xì)胞實(shí)際大?。?mu;m）= 目鏡測(cè)微尺格數(shù) × 目鏡每小格實(shí)際長(zhǎng)度
3、數(shù)據(jù)處理
統(tǒng)計(jì)所有測(cè)量細(xì)胞的大小數(shù)據(jù)，計(jì)算平均值（如桿菌的平均長(zhǎng)度、平均寬度）。
記錄不同放大倍數(shù)下的校準(zhǔn)值和測(cè)量結(jié)果，整理成實(shí)驗(yàn)表格，確保數(shù)據(jù)可追溯。
四、實(shí)驗(yàn)后整理與注意事項(xiàng)
1、儀器清潔與整理
取下鏡臺(tái)測(cè)微尺，用清水沖洗干凈后晾干；目鏡測(cè)微尺可留在目鏡中，或取出后放入專(zhuān)用盒保存。
清潔顯微鏡：用擦鏡紙擦拭物鏡和目鏡，載物臺(tái)用濕紗布擦凈，關(guān)閉光源，將顯微鏡歸位。
2、關(guān)鍵注意事項(xiàng)
校準(zhǔn)必須針對(duì)每個(gè)物鏡單獨(dú)進(jìn)行，不同放大倍數(shù)的校準(zhǔn)值不可通用。
測(cè)量細(xì)胞時(shí)，若視野中細(xì)胞重疊或變形，需更換視野重新選取，避免數(shù)據(jù)誤差。
油鏡使用時(shí)，香柏油需滴在鏡臺(tái)測(cè)微尺或樣品的正中央，且觀察后必須立即清潔，防止鏡頭被腐蝕。
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