HSF 人 成年人皮膚成纖維細(xì)胞
中國(guó)微生物菌種查詢(xún)網(wǎng) / 2016-01-18 08:53:59
細(xì)胞庫(kù)編號(hào)：KCB 200537
細(xì)胞株名稱(chēng)：HSF 人 成年人皮膚成纖維細(xì)胞
種屬：人
性別：男
組織來(lái)源：包皮
生長(zhǎng)特性：貼壁生長(zhǎng)
形態(tài)特征：成纖維細(xì)胞樣
微生物，支原體檢測(cè)：陰性
培養(yǎng)條件：
完全培養(yǎng)基： DMEM（內(nèi)含2mM L-glutamine）+10%新生牛血清(NCS).
血清我們推薦用:
GIBCO-NCS-16010用質(zhì)量不好的血清不能保證此細(xì)胞會(huì)有好的生長(zhǎng)狀態(tài),并且傳代數(shù)不會(huì)很高.
培養(yǎng)條件：37.0C , CO2: 5%
傳代方法：
收到細(xì)胞后，在倒置顯微鏡下觀察整個(gè)細(xì)胞生長(zhǎng)情況：
如果細(xì)胞未長(zhǎng)滿(mǎn)，用75%酒精噴灑整個(gè)瓶消毒后放到超菌臺(tái)內(nèi)，嚴(yán)格無(wú)菌操作，打開(kāi)細(xì)胞培養(yǎng)瓶，吸出培養(yǎng)液，換 10ml新鮮培養(yǎng)液后繼續(xù)培養(yǎng)。
如果細(xì)胞已長(zhǎng)滿(mǎn)（達(dá)80-90%），即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。具體步驟如下：
1. 棄去培養(yǎng)液，用不含鈣、鎂離子的PBS洗1-2次。
2. 加1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，倒轉(zhuǎn)放于37℃培養(yǎng)箱1-3分鐘預(yù)熱，然后將培養(yǎng)瓶翻過(guò)來(lái)讓胰酶與細(xì)胞面接觸大約10-30秒后，在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量完全培養(yǎng)基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶（25cm2）補(bǔ)加完全培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出一半，分到新的培養(yǎng)瓶中。如果沒(méi)有特別說(shuō)明，收到細(xì)胞后的第一次傳代一般是一傳二。
注：1、觀察細(xì)胞最好在低倍鏡（4或5X物鏡)下進(jìn)行，否則不能準(zhǔn)確判斷細(xì)胞的傳代密度?？醇?xì)胞的形態(tài)請(qǐng)?jiān)?0X或20X物鏡下。
2、瓶中運(yùn)輸培養(yǎng)基不能重復(fù)再用,請(qǐng)換用加雙抗的新培養(yǎng)基，細(xì)胞凍存后,培養(yǎng)基中可不加任何抗生素。
3、有些細(xì)胞貼壁不牢，如發(fā)現(xiàn)貼壁細(xì)胞有脫落，可離心吹打后接種到新瓶?jī)?nèi)。
4、收到細(xì)胞后，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細(xì)胞有污染，請(qǐng)及時(shí)與我們聯(lián)系。
凍存方法：
凍存液：90%完全培養(yǎng)液，10%DMSO（細(xì)胞培養(yǎng)級(jí)），現(xiàn)用現(xiàn)配。
儲(chǔ) 存：液氮。
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